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介紹人類乳頭瘤病毒(HPV)是最常見的性傳播感染和與幾種類型的癌症。的病例數HPV-associated頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCCs),特別是口咽癌,近年來顯著增加,盡管吸煙降低利率。目前,沒有數據有關的風險因素和流行HNSCC患者人乳頭狀瘤病毒在巴西所有地區,很難推動公共衛生這一領域的進步。因此,我們的目標是確定感染人乳頭狀瘤病毒的影響,包括與不同基因型人類乳頭瘤病毒,在頭部和頸部癌症的危險因素與頭部和頸部癌症的發展所有地區的巴西。
和分析方法這是一個病例對照研究,包括622名患者和622名對照所有地區的巴西。問卷調查將被應用到收集信息在社會人口、行為和健康因素。口服、宮頸或陰莖陰囊和肛門標本和血清樣本將收集到的所有參與者。Formalin-fixed從腫瘤石蠟包埋組織切片分析隻會在集團。分子和血清學分析將評估的存在和作用進行人乳頭瘤病毒的頭頸部癌症的發展。
道德和傳播這個項目被批準的研究倫理委員會提出機構(醫院Moinhos de Vento 2.852.060數量)。倫理批準合作者目前正在評估和還沒有完成。這項研究的結果將會在會見巴西衛生部通過技術報告和科學界在國家和國際事件,隨後出版的科學文章。
- 病例對照研究
- 人乳頭狀瘤病毒感染
- 頭部和頸部癌症
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來自Altmetric.com的統計
本研究的優點和局限性
評估之間的關聯人乳頭瘤病毒(HPV),頭部和頸部癌症在巴西的所有地理區域將進行,不同的站點以及組織和血清抗體將被分析。
廣泛的不同風險因素的評估與頭部和頸部癌症將有關。
評估性伴侶會讓人乳頭狀瘤病毒傳播途徑的識別。
一些數據,比如飲食和性行為的數據,將回顧性收集,因此容易回憶偏倚。
盡管我們從整個國家包括病人,我們不能排除選擇性偏差由於過度暴露於一定的風險因素。
介紹
據估計,病毒感染負責所有人類癌症的15%。1人類乳頭瘤病毒(HPV)在這個領域受到關注由於其識別病原體的幾種類型的癌症,如頸、陰莖,外陰和肛門癌以及頭頸部鱗狀細胞癌(HNSCCs),特別是口咽癌。2 3
即使整體減少吸煙和飲酒,4HPV-associated頭部和頸部癌症病例的數量每年增長了大約5%,達到流行水平,尤其是在發達國家和年輕人。5在美國,口咽鱗狀細胞癌是最常見的HPV-associated癌症,6,據估計,到2020年,口咽癌病例的數量將超過子宮和宮頸癌病例。3個5HNSCC的發展是一個多因子的過程,導致不同clinical-pathological腫瘤相關或不相關的人乳頭狀瘤病毒的特征。
這種類型的HPV-induced癌症發病率的增加與性行為的改變有關,與男性發病率增加四倍。7因為人乳頭狀瘤病毒是最常見的性傳播感染(STI),口咽地區可能發生的汙染通過陰道,肛門或口腔性接觸。8 9
在一些人,這感染進展通過特定類型癌症的病毒-宿主相互作用。2 10然而,我們有一個有限的理解為什麼致癌口腔人乳頭狀瘤病毒感染發展成癌症在某些個人和他人及其與煙草,這是一個公認的口咽癌的風險因素,以及飲食、性行為、口腔衛生和其他潛在的混雜因素風險。11 - 13
沒有全國性的數據關於巴西的頭部和頸部癌症和HPV感染。一些研究已經描述了一個低的口腔人乳頭狀瘤病毒感染發生率在巴西的人口,14日15但乳頭瘤病毒患病率研究的結果在巴西(POP-Brazil)仍懸而未決,患病率可能提供更精確的數據。16因此,我們設計了這個協議評估人乳頭狀瘤病毒的流行在頭頸部癌症患者和他們的伴侶理解之間的交互HPV感染及其不同的已知風險因素。
目標
評估人乳頭狀瘤病毒和口咽癌之間的聯係在巴西的所有地區。
二級目標
確定人乳頭狀瘤病毒的流行及其在腫瘤類型的口咽癌患者在巴西。
確定人乳頭狀瘤病毒的流行及其在不同的身體類型區域,如口腔、肛門和生殖器區域,在HPV-induced口咽癌患者以及他們的性伴侶和控製參與者。
確定影響人乳頭狀瘤病毒血清陽性的患口咽癌的風險。
確定感染類型和感染的頻率在不同站點的病人和他們的合作夥伴。
評估病人的癌基因蛋白在腫瘤組織之間的聯係和hpv口咽癌。
評估行為和生活方式因素與口咽癌有關。
和分析方法
設計
口咽癌的研究和人乳頭狀瘤病毒在巴西(停止)將是一個多中心、全國性的病例對照研究。這種設計允許多個風險因素的同時檢查和有助於建立協會作為未來研究的基線。
招聘
該項目將包括參與者在整個巴西國土的招收參加三級醫院在巴西的所有地區。我們將選擇至少一個醫院五巴西地理區域和參與者中心的數量將會增加,直到我們達到的最小樣本量計算。醫院應該提供大量的頭部和頸部癌症患者,應該有必要的物理結構和人力資源的生物材料的集合。評估患者的頭部和頸部癌症的所有地區都將代表國家人口和支持國家公共衛生政策決策的信息收集。
我們將考慮並邀請所有符合條件的個人滿足入選標準參與這項研究。
入選標準
符合條件的患者必須超過18歲新診斷頭頸部鱗狀細胞癌,化療或放療,從診斷不超過45天。情況下將包括那些國際疾病分類,10日修訂(icd - 10)口咽癌的診斷代碼(icd -: C01;C02.4;C05.1;C05.2;C09.0-C09.9;C10.0——C10.9 C14.2)、口腔癌症(icd -: C00.3-C00.9 C02.0-C02.3, C03.0-C03.9, C04.0-C04.9;C06.0、C06.1 C06.2 C02.8),喉癌(icd -: C32.0-C32.9),咽下的癌症(icd -: C12 C13.0-C13.2 C13.8-C13.9)和口感癌症(icd -: C05.8和C05.9)。
代碼C80(惡性腫瘤,沒有本地化規範),C06.8(惡性腫瘤的其他部分和未指明的嘴,與侵入性損傷),C06.9(口腔惡性腫瘤,不明)和C02.9(舌頭,不明)將包含在試點階段和評估他們的發病率,因為與HPV感染相關的位置經常是口咽。ICD代碼C80最初將包括從大量的頭部和頸部癌症患者在巴西進行分類的代碼,因為一個未知的頭部和頸部的主要腫瘤。
控製參與者沒有癌症的曆史將會選擇相同的人口和從同伴中任何病人或病人在同一醫院視為良性的條件。他們將頻率匹配情況下按性別、年齡5年類別和居住的小鎮。
當前的所有患者性伴侶將被邀請參加這項研究以來收集的數據從這個人口關於HPV可以提供重要的信息傳播。控製和性伴侶將超過18歲。
排除標準
例和控製接受化療、放療或免疫療法或少於5年的治療其他類型的癌症,包括non-melanoma皮膚癌,將被排除在外。我們還將排除孕婦、病人服用幹擾素和那些經曆了實體器官移植和正在接受免疫抑製治療。
數據收集
醫療保健專業人員將在其位置的訓練和認證團隊協調員數據收集。基於驗證工具的標準化問卷將評估如下:
社會人口變量:年齡,性別,種族/膚色、教育水平、職業地位和上個月的家庭收入會分析。我們定義根據巴西社會階層研究企業協會(Associacao Brasileira de senior de盡管如此),參與者分成了四個不同的組,A, B, C和d e,根據訪問特定的商品和服務。17
吸煙狀況、飲酒和其他藥物使用:終身吸煙習慣問題(包括數量和頻率)以及酒精和其他藥物使用(包括合法的和非法的毒品)將基於調查問卷從其他研究。18 - 20
性和生殖衛生:性取向,性關係,使用避孕套的性伴侶數量以及性實踐分析。生殖健康問題將評估信息,比如月經初潮的年齡懷孕和分娩、流產史,使用避孕方法和性傳播感染的發生。
口腔衛生:問題的牙齒中提取,使用口服防腐劑,刷牙頻率、頻率用牙線清潔牙齒,牙齦出血和訪問頻率牙醫將被包括在內。11日18日21
飲食和食品消費:食品消費頻率、食品集團消費和加工/ ultraprocessed食物的攝入將會通過食物頻率問卷評估改編自其他的研究,如歐洲癌症與營養前瞻性調查和監測係統風險和保護因素為慢性疾病通過電話調查研究。22日23日
方麵相關的頭部和頸部癌症:問題認知的健康、獲得衛生服務和家族史的癌症(癌症家族史,類型的癌症在家庭成員、親屬關係的診斷和學位)將被要求。
評估這些信息是重要的控製公認的危險因素,如酒精和煙草使用、口咽癌和分析其他潛在不信他的風險因素,如性行為、口腔衛生和飲食差異。
生物采樣
生物樣品從口腔、生殖器和肛門區域和血清樣本將收集到的所有參與者包括性伴侶;formalin-fixed石蠟包埋組織(FFPET)樣本情況下也將分析(圖1)。
生物采樣過程的流程圖。FFPET, formalin-fixed石蠟包埋組織;人乳頭狀瘤病毒,人乳頭瘤病毒;迅速,快速抗原蛋白原位顯示。
口腔樣本將通過30年代漱口水,漱口周期10毫升的標準化的商業漱口水。24日25日頸樣品將收集的醫療保健專業人士使用Digene HC2 DNA收集裝備(試劑盒、Hulsterweg、荷蘭)遵循製造商的指示。陰莖將使用FLOQSwabs鎮定的樣品(科潘)以前無菌生理鹽水滋潤。集合後,FLOQSwabs將存儲在2毫升eNAT®保護媒介核酸(科潘)。肛交樣品將使用一個鎮定的Digene女性拭子標本收集裝備。參與者將被要求將3厘米的拭子插入到肛管,旋轉360°至少兩次,然後輕輕地把拭子。26參與者將由醫療專業人員和指示將收到了兩種類型的self-collection示意圖說明供參考(在線補充文件1)。研究人員將繼續尋求幫助在所有程序可用。上麵描述的所有生物樣本將冷藏2°C - 8°C和運送到一個中央實驗室的阿雷格裏港進行樣品處理。溫度將監控數據記錄器。
血清識別HPV-specific抗體的存在,將收集的采樣microtainer血液采集管(不鏽鋼,正欲)。14 16 1730分鍾內收集、血液樣本將離心機,血清整除,儲存在−20°C,直到傳輸到中心實驗室。
FFPET塊從診斷性活檢手術材料或將收集DNA / RNA隔離和病理診斷確認。DNA / RNA隔離,FFPET塊將在5µm分為十個部分,分成兩個超小型電子管每管(5節)。p16分析和圓)染色,四個部分在3µm將分布在四個TOMO粘附顯微鏡載玻片(11/90)(美國貝靈漢Matsunami)每張幻燈片(1節)。避免交叉汙染,核酸在每個FFPET塊部分,切片機刀片將改變,丙酮和乙醇將用於清潔分割區域和部分運往p16的分析,和圓)染色法將從同一塊的開始和結束部分。的FFPET整除將保持在室溫(15°C-25°C)。
所有數據,包括麵試、采樣和實驗室處理數據,將聚集在一個致力於在線平台數據存儲和分析這個項目。通過這個係統,我們可以控製研究的進度和質量,以及使結果可用於衛生專業人員和參與者通過外部網頁界麵。
標本處理
在中央實驗室,生殖器拭子樣本將單一化整除和存儲在冰箱前−80°C。口腔樣本將首先在2000轉離心10分鍾;8毫升的顆粒將被篩選了1 x磷酸鹽(PBS)和將再次離心。最後的顆粒將篩選了3毫升1 x PBS。
處理過的生殖器,肛門和口腔樣本整除將提交自動化核酸提取使用磁珠分離和純化由麥格納純LC 2.0儀器(羅氏分子係統)。用同樣的自動化儀器,RNA和DNA將使用信用證從FFPET部分中提取RNA三世(組織)和LC DNA二世(組織)隔離包,分別。
的存在和基因分型人乳頭狀瘤病毒從FFPET部分純化的DNA和口腔、生殖器和肛門將樣品分析Novaplex II HPV28檢測設備(Seegene說,首爾,韓國)和CFX96實時PCR儀(Bio-Rad、Schonenbuch、瑞士)。這個係統是基於多個實時PCR試驗能夠區分目標核酸的27人乳頭狀瘤病毒類型。測試檢測高危(人力資源)人乳頭狀瘤病毒類型(16,18歲,26歲,31歲,33歲,35歲,39歲,45歲,51歲,52歲,53歲,56歲,58歲的59歲,66年,68年,69年,73年和82年)和其他類型的HPV感染(40 6日,11日,42歲的43歲,44歲,54歲,61年和70年)。一個內生的內部控製將被用來監測核酸隔離和檢查可能的PCR抑製。該協議將按照製造商的建議進行。
我們將使用提取的RNA FFPET部分的E6 / E7致癌基因的轉錄分析HR-HPV菌株。這些分析將使用多路複用執行反向transcriptase-PCR xMAP方法論(Luminex)。27
從血清E2抗體、E6、E7蛋白將從上述相同HR-HPV類型確定使用快速ELISA抗原蛋白原位顯示。28
FFPET幻燈片將圓)染色證實腫瘤細胞的存在。免疫組織化學檢測使用一個E6H4克隆和CINtec p16組織學工具包(瑞士巴塞爾羅氏技術)29日和一個Ventana基準自動幻燈片色料將評估進行p16質量。會分析數據形態在中央實驗室由一個訓練有素的病理學家。
數據分析和統計
分類變量將被總結絕對頻率和百分比和連續變量通過和SD。X2和費舍爾的確切比例測試將被執行的比較和t或非參數Mann-Whitney U將連續變量分析進行測試。
HPV感染之間的聯係和sociobehavioural變量將估計計算原油和使用邏輯回歸調整口服補液鹽。可能影響修飾符將被評估使用交互方麵。的共線性性行為和習慣如吸煙、飲酒和吸毒將通過獨立的模型建設調查為不同的風險因素。我們將比較情況下的風險與控製以及性伴侶。所有的參與者包括將提供答案相同的問卷,並進行生物抽樣程序,除了組織評估。我們還將計算由於暴露的風險。這是一個衡量協會使用的兩個風險估計和之間的絕對差可以用來評估可能的因果關係。
抽樣和樣本容量
評估口咽癌之間的關聯和口腔人乳頭狀瘤病毒,顯著性水平為95%和90%的力量,預計11%的患病率控製和18.3%情況下估計。30 31我們將招收622名患者和622名對照,作為樣本估計損失了20%。此外,所有患者的性伴侶有興趣參與這項研究將包括在內。將分層抽樣根據癌症發病率在每個地理區域。
監測和質量控製
建立了標準化手冊相關監測和質量控製在項目開發階段。
的質量控製過程包括培訓團隊參與收集數據在每個站點,以及團隊的認證和換發新證(通過書麵測試和模擬麵試)。我們還計劃進行監控,通過期刊采訪觀察和定量數據監測報告由係統生成。
訓練研究協調團隊將執行一個盲人複試通過電話為20%的參與者之間的包含2和4周後的參與者。協議的程度將會通過分析kappa係數等措施,變異係數和係統觀測之間的區別。
試點研究將確定數據收集和正確的問題,物流和實驗室程序。
病人和公眾參與
無論是病人還是公眾參與研究設計和/或協議。同意巴西研究倫理的監督管理機構,這要求我們給反饋考試目前在全國實施,生殖器HPV結果將傳達給參與者由衛生保健提供者。HPV感染的結果在其他網站將不會提供。病人將告知結果的意義和接收指令關於性病預防和後續根據國家指導方針。
道德和傳播
倫理批準獲得倫理委員會提出機構(醫院Moinhos de Vento 2.852.060數量)。倫理批準合作者目前正在評估和尚未完整(在線補充文件2)。試點項目正在進行,預計招生在2020年底完成。
個人包括在這項研究將自願參與,必須簽署知情同意書。這個項目符合決議347/05和466/2012的國家健康委員會的決議。在研究過程中,生物材料將隻與本研究相關的研究人員訪問。備份樣品將被保存在一個適當的存儲位置在阿雷格裏港,和知情同意將包括具體授權生物材料的存儲。參與者的生物樣品檢測呈陽性的高檔生殖器HPV得知這個結果就會由醫療機構的醫療服務提供者和照顧每個醫院的協議。報告的結果將通過一個計算機化的數據係統。所有生物樣品將遵循所有生物安全程序和降低風險的目的。
這項研究的結果將會在會見巴西衛生部通過技術報告。結果將提交給科學界在國家和國際事件,隨後出版的科學文章。
討論
雖然強大的證據表明人乳頭狀瘤病毒的重要病原學的貢獻,頭部和頸部癌症的發展,現有的數據仍然在不同人群之間變化,不存在大量的國家,如巴西。3 5 32 33
值得注意的是,自1980年代末以來,頭部和頸部癌症與人乳頭狀瘤病毒發病率下降,而腫瘤HPV感染相關的增加。34 35這種不斷增加的發病率是最有可能與HPV感染的患病率上升全球男性和女性,特別是16型人乳頭狀瘤病毒,通常與口咽癌有關。36頭部和頸部癌症與HPV感染影響年輕患者和有更好的預後比頭部和頸部癌症與人乳頭狀瘤病毒。這些特征已經導致分期以及修改可能導致治療基於人乳頭狀瘤病毒狀態改變的未來。36人乳頭狀瘤病毒的病原學的角色發展的幾種癌症存在;然而,人乳頭狀瘤病毒的作用在巴西的頭部和頸部癌症的起源尚不清楚。此外,其他風險因素的影響與頭部和頸部癌症也是未知的。因此,不同方麵關於飲食、吸煙習慣、性衛生和口腔衛生可能會創建一個交互環境有利於口咽癌的發病。
盡管病毒相關疾病,這種疾病的優勢在最近的出版物,目前尚不清楚頭部和頸部癌症發病率的增加僅僅對性行為的變化和相關的發病率增加人乳頭狀瘤病毒或其他因素尚未確定。
另一個重要的問題涉及到的角色的初級預防接種這一病理。在這項研究中收集的數據可以幫助加強性別中立的HPV疫苗接種覆蓋率的必要性以及幫助項目當前的覆蓋率對癌症發病率和死亡率的影響。
接種HPV疫苗一直提倡作為一級預防宮頸癌的方法。2014年,美國國家人類乳頭瘤病毒疫苗接種計劃使用四價的疫苗,包括免疫接種HPV類型6,11日,16和18與生殖器疣和宮頸腫瘤被啟動。POP-Brazil研究的結果證實,這位年輕的巴西人口受到不同類型的人乳頭狀瘤病毒;然而,沒有數據從老年人口或頭頸部癌症患者在所有巴西地區。因此,有必要研究評估這種感染的患病率在頭頸部癌症患者在巴西的所有地區以及研究評估人乳頭狀瘤病毒的大小和頭部和頸部癌症協會在巴西人口考慮行為和飲食習慣。
我們將生產信息和潛在的臨床應用,闡明傳輸模式和協會的影響和發展公共衛生實踐和項目管理的工具。結果將提供一個更好的理解之間的聯係HPV感染和頭頸癌,允許高危個體的識別和生成假設使用特定人群的預防或篩選措施。此外,本研究的數據可以用來評估可能會受益於人類乳頭瘤病毒疫苗接種的特定人群。這項研究的結果也可能是與未來的研究相比,為後續建立一個基線和生存研究患者的頭部和頸部癌症與HPV感染有關。
引用
腳注
貢獻者EMW、DS、FSF構思項目和參與的所有階段的手稿。NLK JDCH和JC參與協議定義。JC參與實驗室協議定義和幫助撰寫了手稿。MB參與統計和數據分析,樣本大小計算和幫助撰寫了手稿。CP, FMAdS GFMP幫助的重要修訂手稿。所有作者回顧了最終版本的手稿。
資金巴西外交部希思連同Moinhos de Vento醫院,通過該計劃支持的機構發展公共衛生係統(PROADI-SUS)資助了這項研究。
相互競爭的利益沒有宣布。
病人同意出版不是必需的。
倫理批準倫理批準獲得倫理委員會提出機構(醫院Moinhos de Vento 2.852.060數量)。倫理批準合作者目前正在評估和還沒有完成。
出處和同行評議不是委托;外部同行評議。