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文摘
介紹形態學評估用於選擇體外受精的胚胎。然而,它並不完全反映植入的潛力。胚胎植入前的基因檢測為非整倍性(PGT-A)可以檢測非整倍體胚胎,但是活檢過程是入侵。目前,非侵入性的頁麵表(ni-PGT)方法使用了媒介正在評估。然而,ni-PGT的臨床效益尚未得到明確的證明。需要一個多中心隨機試驗來驗證ni-PGT能否評估胚胎是一種新的有效工具。
和分析方法總體而言,1148名35 ~ 42歲的夫婦(女性)接受體外fertilization-intracytoplasmic精子注射計劃錄取。夫妻將數字隨機ni-PGT(1)和(2)傳統形態學組治療在1:1的比率。主要的結果將是持續的懷孕率與第一個傳輸周期在6個月後卵母細胞檢索。
道德和傳播研究協議是經倫理委員會批準的北京大學第三醫院和參與醫院。結果將通過國際會議和傳播科學期刊。
試驗注冊號碼NCT04339166。
- 產前
- 胚胎學
- 產前診斷
這是一個開放的分布式條依照創作共用署名非商業性(4.0 CC通過數控)許可證,允許別人分發,混音,適應,建立這個工作非商業化,和許可他們的衍生產品在不同的協議,提供了最初的工作是正確地引用,給出合適的信用,任何更改表示,非商業使用。看到的:http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/。
來自Altmetric.com的統計
本研究的優點和局限性
這是第一個雙盲多中心隨機對照試驗比較進行胚胎移植後懷孕率選擇非侵入性的胚胎植入前的基因檢測(ni-PGT)與傳統的形態學評價與1148對夫婦在13個中心在中國。
胚胎選擇ni-PGT,特別關注的臨床受益ni-PGT作為一種新的有效的指標來評估胚胎。
本研究開發跟進和程序,並使用一個專用的電子數據采集係統。
試驗注冊出版物和研究協議確保研究的透明度。
沒有執行成本效益分析。
介紹
形態學評價廣泛用於胚胎選擇體外fertilization-embryo轉移(IVF-ET)但不能夠檢測染色體異常。1 - 3胚胎染色體異常發生的由於錯誤在細胞有絲分裂和減數分裂。4個5染色體異常患者更常見一個先進的母親的年齡。染色體非整倍性的風險大約是20%到31%的女性26到34歲之間。年齡≥35歲時,卵母細胞和胚胎非整倍性的發生率逐漸增加(34%對75%)。6 7研究已經證明,非整倍性導致胚胎植入胚胎發育失敗或被捕;8因此,成功自然和體外受精懷孕的概率顯著降低在老年婦女流產率增加。為了提高體外受精效果,評估胚胎植入前通過胚胎植入前的基因檢測非整倍性(PGT-A)特定的跡象,如老年婦女或複發性流產患者或植入失敗。在轉移到子宮之前,胚胎染色體倍性的檢查和測試。臨床研究表明,試管嬰兒的臨床結果確實是提高了PGT-A。9日10Munne等11進行了跨國多中心臨床試驗,比較了PGT-A non-PGT-A。結果顯示35 - 40歲PGT-A集團的持續的懷孕率在統計學上增加,但沒有這樣的趨勢人< 35歲。11常等12069年與97年相比5471年PGT-A周期non-PGT-A周期,人們年齡≥35 PGT-A組顯著降低流產率。然而,問題是,這樣一個活檢過程是侵入性和傳達了不為人知的健康風險的長期發展的胚胎。13 - 16因此,微創方法評估胚胎的倍性狀態是高度優先領域的試管嬰兒。
細胞遊離DNA (cfDNA)花文化傳媒(SCM)在2013年首次展示。17然後,幾項研究評估了非侵入性SCM-based PGT-A方法。非侵入性染色體篩查(nic)技術,ni-PGT命名,於2016年首次報道。也是第一次,網卡是用於平衡易位病人和五個活產獲得七夫婦。18PGT-A滋養外胚層活檢或整個胚胎和SCM顯示一致性比率在78.2%和100%之間。18 - 23然而,其他研究報告一致性率在32.2%至56.3%之間。24日25日
非侵入性的頁麵表被一些研究初步應用。21日18 - 26歲之間的cfDNA-based ni-PGT顯示一個潛在的能力改善的懷孕率和較低的流產。然而,這些臨床試驗的規模很小,更大的試驗將進一步支持ni-PGT作為滿意的工具評估潛在的胚胎植入。
和分析方法
研究背景
本研究將在13個中國醫院:北京大學第三醫院;南京大學附屬金陵醫院、醫藥學校;河北婦產科醫院生殖醫學中心;西北地區婦女和兒童醫院;中國人民解放軍總醫院;中國醫科大學盛京醫院;第一附屬醫院;中山大學;Citic-Xiangya生殖與遺傳專科醫院;北京大學深圳醫院; The Second Hospital of Hebei Medical University; West China Second Hospital of Sichuan University; The Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University and The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University. Yikon Genomics and Xukang Medical Science & Technology (Suzhou) will provide ni-PGT testing using NICS. The progression of the trial will be observed by an independent data and safety monitoring board (DSMB).
合格標準
女性來參與醫院生殖醫學中心將對我們的試驗篩選確定資格。
入選標準
不孕不育夫婦接受輔助生殖ICSI程序。
女性年齡35 - 42。
女性的身體質量指數從18到30公斤/米2。
女性接受控製卵巢過度刺激治療,包括超協議,long-protocol,短期協議治療促激素受體激動劑(GnRH-a)協議和GnRH拮抗劑(GnRH-ant)協議;和卵母細胞的數量≥6。
文化胚胎囊胚階段,所有的胚泡將單獨凍存。
單一解凍胚泡將首次轉讓。
隻有病人的囊胚≥2和胚泡的形態大於4 bc / CB將被包括在內。27
書麵知情同意。
排除標準
IVF和ICSI的禁忌症,如肝髒疾病、腎髒疾病、I型和II型糖尿病,心髒病,貧血,不受控製的高血壓、腦血管事件的曆史,曆史的深靜脈血栓形成和/或肺栓塞、子宮頸、子宮內膜癌和乳腺癌確診陰道出血。
胚胎植入前的基因測試周期,包括PGT-A頁麵表為單基因疾病(PGT-M)或頁麵表結構染色體缺陷(PGT-SR)。
疾病可能影響妊娠結局,包括生殖器畸形、輸卵管積水、宮內感染、子宮肌瘤大於4厘米,良性腫瘤腹腔盆腔或大於4厘米,子宮內膜厚度小於8毫米,垂體腫瘤和惡性腫瘤。
未經處理的hyperprolactinaemia、甲狀腺疾病、腎上腺疾病。
女性治療子宮內膜息肉解凍之前傳輸周期。
的決心輟學
所有患者簽署知情同意書將有權撤回他們的同意,在任何階段退出試驗。輟學生是隻考慮隨機。那些隨機前撤回同意,刺激取消了,可憐的受精,胚胎的胚胎發育不佳或不能達到4 bc / cb階段並不輟學生。
輟學的原因:
研究人員決定退出:
發生嚴重不良事件(節約),患者不適合繼續研究根據研究者的判斷。
囊胚轉移之前,患者有其他疾病或特殊生理變化,不宜繼續。
病人沒有第一個胚泡轉移後6個月內卵母細胞檢索。
病人沒有完成第一個傳輸優先順序由於解凍失敗。
在緊急情況期間的研究中,失明的病人都折斷了。
病人取:
不管出於什麼原因,患者拒絕繼續試驗過程或撤回同意。
雖然病人不同意撤軍,但他們不再接收訪問和跟蹤。
招聘
門診不育夫婦將由專門的人員篩選。試驗的細節將被解釋為研究成員。夫妻會有時間來考慮參與研究項目。計劃參加的夫婦將簽署的同意書或卵母細胞檢索前的一天。資格的病人將繼續傳統的臨床實踐。
隨機
分配和隨機將當夫妻≥2胚泡。它們包括一個在線軟件生成一個隨機名單,分配參與者在一個1:1比例ni-PGT或形態組,四塊大小。程序將執行的員工沒有參與這項研究的治療。
基礎墊層
參與者和臨床醫生/護士參與實驗過程,以及調查和數據分析師將蒙蔽參與者分配。解凍胚胎學家排名的胚泡會知道分配。在這項研究中,Yikon基因組學和旭康醫療科技也會失明。
幹預措施
卵巢過度刺激和卵母細胞控製檢索
控製卵巢過度刺激將通過標準進行例行程序根據各中心。選擇GnRH-a或GnRH-ant協議將由醫務人員參與這項研究。
卵母細胞檢索後安排36小時(±2)人類絨毛膜促性腺激素(hCG)注入。卵母細胞檢索將執行使用17 - 18 G針經陰道超聲指導下卵母細胞願望。卵母細胞後立即檢索,檢索到的積雲卵母細胞複合體將培養在37°C和5%或6%股份有限公司2孵化器。考慮到現有流程的多個中心,培養基是來自不同製造商(Vitrolife,庫克,鼠尾草和奎因)。
ICSI
ICSI將如前所述。28簡而言之,剝蝕的完整性和成熟卵母細胞將被檢查。期間將執行一個酶去除卵母細胞準備。隻有中期ii將注入卵母細胞。
受精的評估
受精的評估將受精大約16小時後進行。受精卵會培養,直到第三天,受精後胚胎質量將被評估,大約在67 - 69小時。卵裂球的數量和尺寸和無核碎片會得分。
刪除積雲細胞和樣本收集
ICSI之前,將赤裸的卵母細胞。3天,如果仍然堅持積雲細胞卵母細胞,輕輕一個適當的脫模的殘渣將被刪除前胚泡的文化。胚泡文化是通過連續媒體three-gas係統中心。在第四天,胚胎將單獨轉入一個新的胚泡培養皿。這些操作可以有效地去除外源性cfDNA汙染,也保證了ni-PGT結果的準確性。29日每個液滴的體積將25µl左右。當胚胎發育到囊胚冷凍標準,將玻化囊胚,大約20µl培養基從每個相應的胚泡將收集到一個核糖核酸酶/ DNase-free PCR管。在冷凍前所有胚胎形態學評估。27
組
幹預胚胎選擇方法不同,ni-PGT組選擇網卡年級的胚胎,和形態組選擇形態學評分最高的胚胎。
Ni-PGT集團
花文化傳媒將收集和測試使用網卡。胚泡將分為三個等級從A到C根據網卡的結果,與整倍體的概率≥0.94,-0.94和0.7≤0.7 A, B和C,分別。在這條小路,試點研究30.放大的胚胎沒有結果失敗或欠結果包含在年級b, b級胚胎轉移的結果比a級胚胎和比c級胚胎。此外,沒有或欠結果整倍性和非整倍性,所以這些胚胎不合適的分級或C .因此,胚胎沒有結果放大失敗或欠結果分級B一個胚泡將解凍和轉移的偏好順序> C > B。評分係統曲線下的麵積值0.92和陰性預測值為0.93。30.如果患者隻有一個胚泡,ni-PGT結果將無法為胚胎的選擇提供參考。所以隨機和分配將當夫妻≥2胚泡。在胚泡與同一年級,胚泡形態更高年級將優先轉移。
形態組
隻有第一個解凍胚泡的形態集團將通過加德納分級係統確定。如果病人有多個評級最高的胚胎,胚胎學家選擇和解凍的胚胎之間的最高評級根據中心標準。胚胎形態等級是5 aa > 5 ab > 5英航> 4 aa > 4 ab > 4英航> 6 aa > 6 ab > 6 ba > 5 bb > 4 bb > 6 bb > 5 ac >公元前5 > 4 ac > 4 > 6交流>公元前6 > 5 ca > 5 cb > 4 ca > 4 cb > 6 ca > 6 cb,這是共識的13個中心參與這個試驗。
花文化媒體形態組胚泡還將收集和測試使用網卡。排名第二,後來解凍囊胚將根據“網卡結果年級結合形態學標準”。
胚泡的準備
如前所述,擴張囊胚將玻化和溫暖。31日如果囊胚冷凍前需要收縮,它是在另一個液滴轉移而不是培養皿。玻璃化和變暖過程將根據每個中心的標準執行。
胚泡轉移和黃體支持
在這項研究中,我們關注第一個胚泡解凍周期,是否ni-PGT組或形態組。子宮內膜準備,胚泡轉移和黃體支持方法將根據每個中心的標準執行。子宮內膜準備包括自然循環和人工周期。胚胎移植是植入窗口中執行。實現的細節是按照每個中心的標準。
後續
測量血液和尿hCG將胚泡轉移後12天。參與者將被診斷為臨床妊娠根據超聲評價轉移後28天。不斷懷孕被定義為一個胎兒心跳發生胚胎移植後12周。分娩後,兩周內將收集以下信息:妊娠並發症,妊娠年齡、交付、新生兒性別和出生體重和並發症。
結果測量
我們的主要結果將是第一個傳輸周期的持續的懷孕率在6個月後卵母細胞檢索。時間框架將12周後第一個胚胎的轉移。持續的懷孕率被定義為臨床妊娠的女性的數量/每組隨機的女性數量。
二級結果的試驗包括臨床妊娠,流產和活產率。然而,隻有培養基將被測試,並將沒有額外的治療病人和胚胎。根據研究胚胎隻能排名標準,也沒有胚胎會被丟棄。因此,將會有一些AEs。
數據管理
收集到的數據將在基線和隨訪中來自醫療記錄。為了保證研究結果的真實性,所有研究者和臨床醫生參與的研究將掌握所有細節研究。所有participant-identifiable數據將存儲在專門的文件,隻有委托成員將可以訪問它們。
安全報告
AEs:任何不利病人在審判經驗。不良經曆可以症狀(如惡心、疼痛),跡象(如心動過速、肝腫大)或測試結果異常(如實驗室檢測、心電圖)。節約:任何不良事件發生在審判期間滿足下列一個或多個標準:導致死亡;直接危及生命;電流需要住院治療或延長住院時間;導致永久的或明顯的殘疾/不足,或嚴重影響日常生活;導致先天畸形或先天缺陷。
所有AEs和節約將報道DSMB和醫學教育技術委員會認可,根據研究協議的要求。
統計分析
樣本大小的計算
我們假設ni-PGT結果會增加懷孕率,降低流產率。根據正在進行的懷孕率平均在13參與中心,35-42年齡組,不斷懷孕率的胚胎選擇的根據“形態學”大約是38.8%,並預計會有10%的差異群體之間的持續的懷孕率。因此,我們使用一個雙邊測試統計α誤差5%和90%的力量,至少516名調查對象將包含在每一組中,共有1032名受試者(ni-PGT組:形態組= 1:1)。考慮完全完成了臨床試驗相對慷慨的估算方法,我們計算了樣本容量根據10%的輟學率,每一組包括574名參與者(總共1148名參與者)。
統計分析
結果將會根據意向處理分析(ITT)原則。敏感性分析,按方案(PP)方法也將實現。ITT人口指所有患者隨機經驗至少一個幹預和幹預評估數據。人民黨人口指的是那些隨機和至少滿足下列標準:(1)滿足入選標準並遵循協議;(2)完成所有計劃訪問;(3)沒有藥物或治療可能影響療效的評價試驗期間使用。這些情況下解凍胚胎不生存第一轉移後6個月內卵母細胞檢索,包括ITT人口但不是PP人口。
丟失的數據將被視為隨機失蹤。last-observation-carried-forward方法將轉嫁缺失的數據。靈敏度分析將測試最好和最壞的假設缺失值的分布。所有次要結果被認為是探索性的。
將通過使用SPSS進行統計分析,V.25.0 (SPSS,芝加哥,伊利諾斯州,美國)。被定義為意義p < 0.05,兩麵。
試驗狀態
在每一個研究中心,招聘2020年4月開始。2022年12月最後招聘估計。
病人和公共部門參與
無論是病人還是公共部門參與研究項目。病人不會參與結果的解釋或寫最後的手稿。作為日常程序研究幹預措施,幹預的負擔將由入學評估夫婦。
道德和傳播
研究方案是北京大學第三醫院的倫理委員會批準,參與醫院。知情同意將之前收集的任何研究過程為夫婦。研究電子數據捕獲將收集到的數據存儲。結果將會在國際會議和發表在同行評議期刊。
倫理語句
病人同意出版
引用
腳注
JH和LR同樣起到了推波助瀾的作用。
貢獻者金橋、PL和LR構思研究的想法。金橋、PL、LR、JH和SL參與的設計研究中,招募參與者和起草的手稿。金橋、PL LR和JH參與招聘的參與者和臨床結果的評估。金橋,PL、LR、JH, LH, JS,信用證,,X-XW, y, YW,生理,YG、YY, WQ和GH監督病人的診斷和在每個研究中心招聘。JH和LZ形成數據管理團隊負責收集和分析所有數據。手稿被JH起草。評估、管理和審批所有作者參與最後的手稿。
資金本研究支持中國國家重點研發項目(2018 yfc1003100)和美國國家科學基金會(82071721)。研究資助者沒有規則的研究設計、實現、分析、手稿、製備或決定提交這篇文章出版。
相互競爭的利益沒有宣布。
病人和公眾參與病人和/或公眾沒有參與設計,或行為,或報告,或傳播本研究計劃。
出處和同行評議不是委托;外部同行評議。