該研究包括橫斷麵篩查和艾滋病毒檢測，隨後是一項為期6個月隨訪的前瞻性隊列研究。在布隆方丹，這項研究在JOSHA研究中心進行。布隆方丹和周圍的Mangaung市約有60萬人口。JOSHA是一個獨立的臨床研究機構，可以從附屬全科診所和合作的政府診所吸引參與者。橫斷麵篩選的參與者是根據mangang - university community Partnership Program (MUCPP)領導的社區參與活動的反饋和社區主要利益相關方的投入開發的方法招募的。招聘方法包括:(1)從艾滋病毒谘詢和檢測、性傳播疾病和計劃生育診所招聘;(2)有針對性的社區外展活動和(3)從其他診所轉診。前瞻性研究的參與者是從橫斷麵篩查的hiv陰性參與者中招募的。

在2001年的人口普查中，勒斯滕堡的人口估計為35萬，但自那以後人口大幅增長，這項研究是在位於市中心的Aurum研究所的勒斯滕堡研究中心進行的。拉斯滕堡的經濟在很大程度上是由鉑金采礦業推動的，這裏有大量的、多樣化的、越來越多的居民被吸引到該地區從事采礦業工作。奧魯姆研究所(原奧魯姆健康研究所)是一個非營利性研究組織，於2007年3月開始開展活動，為拉斯滕堡市政府從事流行病學研究和未來的臨床研究試驗做準備。橫斷麵篩選的參與者是從各種以診所為基礎的和社區設置中招募的，其中包括對當地大學的強調。為了便於橫斷麵篩選的招募和登記，在研究後期對方案進行了兩次修改，增加了被調查者驅動抽樣的招募目的(而不是推斷) 7並放寬性行為資格標準。在勒斯滕堡招募了男性和女性進行橫斷麵篩查，但隻有艾滋病毒陰性的女性被邀請參加前瞻性研究，因為那裏有一個單獨的男性隊列研究。

在知情同意過程和分配參與者編號後，誌願者被認為已登記。使用人口統計學和艾滋病毒風險因素問卷對登記的參與者進行橫斷麵測試的資格篩選。兩個網站的招募和篩選工作人員對具體的行為資格標準一無所知，以避免信息在社區傳播，並防止誌願者為了參與研究而改變自我報告的行為。所有參與者都被要求填寫完整的問卷，不管他們最初的答案是什麼。

隻有符合條件的女性接受了測試。是否有資格接受艾滋病毒和懷孕檢測取決於年齡(篩查時為18-35歲)和在過去3個月內至少符合下列自我報告標準之一的性感染艾滋病毒的推定較高風險:(1)性傳播感染的治療、診斷或體征/症狀;(2)與多名伴侶發生陰道或肛門性交(僅在勒斯滕堡發生無保護性交);(3)與新的性伴侶發生陰道或肛門性交(僅在勒斯滕堡發生無保護性交)或(4)與感染艾滋病毒但未使用抗逆轉錄病毒療法的伴侶發生性行為。在Rustenburg研究接近尾聲時，我們修改了這些標準，刪除了對女性多個性伴侶和無保護的性行為的要求，因為我們懷疑我們篩選了許多風險較高的女性，而且避孕套使用報告不準確。符合條件的參與者根據國家指導方針，在艾滋病毒檢測前和檢測後谘詢的範圍內進行了艾滋病毒檢測。女性還進行了尿檢。兩項測試的結果都在參與者訪問期間提供給他們。

如果婦女符合橫斷麵年齡和行為標準，艾滋病毒陰性和懷孕陰性，並且不打算在近期內從該地區搬遷，她們就有資格進入前瞻性隊列研究。目標前瞻性研究的規模是在每個地點的前400名符合條件的婦女，每月隨訪長達6個月。在每次每月訪問中，參與者提供最新的醫療和行為信息，進行艾滋病毒和懷孕檢測，(根據需要)接受性傳播感染綜合症管理，就減少艾滋病毒風險的做法提供谘詢，並獲得免費避孕套。

HIV檢測使用雙重快速檢測算法，同時使用雅培確定HIV - 1/2和三一生物技術Uni-Gold，對手指點血樣本進行檢測。兩個陽性結果被認為是陽性，兩個陰性結果被認為是陰性，這超出了國家艾滋病毒檢測指南。差異或不確定的樣品用第三種快速試劑SD BIOLINE HIV-1/2 3.0進行檢測，作為平局。使用Quidel QuickVue hCG-Combo試驗對尿液樣本進行妊娠檢測。所有測試都是根據製造商的規範進行的。

在篩查或隊列研究中檢測出艾滋病毒陽性的參與者按照當地的指導方針進行護理。此外，那些在前瞻性階段血清轉換的參與者在急性感染期被強烈建議進行二級艾滋病毒預防，並在勒斯滕堡被邀請加入一個血清轉換隊列並持續密切監測。被發現懷孕的參與者被推薦進行產前護理。在隨訪期間懷孕的參與者繼續進行研究訪問。

協議、知情同意書、參與者教育和招募材料、病例報告表格和探訪補償金額(50蘭特)均由FHI 360倫理委員會和當地倫理委員會、自由州大學布隆方丹倫理委員會和誇祖魯-納塔爾大學勒斯滕堡生物醫學研究倫理委員會審查和批準。

在報名和數據收集前，我們獲得了每位參與者的書麵知情同意。雖然參加研究不需要標本存儲同意，但長期標本存儲和可能的未來測試也需獲得書麵同意。知情同意表格以英文提供，並被翻譯成當地語言Sesotho(布隆方丹)和Sestwana和IsiXhosa(勒斯滕堡)，以加強理解。誌願者可以選擇知情同意過程中的語言，由一名非研究工作人員為不識字或文化水平低的參與者見證和核實。

所有符合條件的參與者都被納入數據分析。對於每個站點，我們總結了橫斷麵篩查參與者和進入前瞻性研究的婦女的社會人口統計學特征、自我報告的性傳播感染症狀和HIV風險行為基線。我們計算了婦女中HIV感染和懷孕的基線流行率，以及95%的ci。我們使用單變量和多變量logistic回歸分析來評估危險因素與流行HIV感染之間的關係。

發病率的計算方法為登記後艾滋病毒血清轉換的數量除以隊列累積觀察的人年(PY)。我們在假設HIV感染數量遵循泊鬆分布的前提下，使用精確的方法計算了95% CI。我們使用比例危害回歸來評估意外艾滋病毒感染和可能的艾滋病毒風險因素之間的關係，包括時間依賴的參與者特征、時間變化的風險行為和自我報告的性傳播感染症狀。由於HIV血清轉化的數量較少，我們隻做了單變量比例危害回歸。數據分析采用SAS V.9.2。

在布隆方丹，橫斷麵篩查在2009年2月至10月期間招募了1364名婦女。在1364名登記的婦女中，1154人被確定有資格進行檢測，1145人(84%的登記者)選擇在橫斷麵篩查中進行檢測。幾乎所有從橫斷麵測試中篩選出來的婦女都沒有滿足行為或性傳播感染風險標準。這項前瞻性研究從篩查中招募了401名艾滋病毒陰性女性誌願者。在401名女性中，399名被確定符合條件，391名進入隨訪並進行了檢測。92.3%的參與者完成了6次研究訪問，平均觀察時間為5.6人月，總觀察時間為164.4 PY。

2008年11月至2009年12月，在勒斯滕堡，橫斷麵篩查招募了946名女性和968名男性。這裏沒有男性參與者的數據。在946名入選婦女中，540名(57%)符合條件，並進行了橫斷麵篩查;幾乎所有從橫斷麵測試中篩選出來的婦女都不滿足行為或性傳播感染風險標準。這項前瞻性研究招募了223名艾滋病毒陰性女性誌願者，其中194人獲得了艾滋病毒檢測數據。在勒斯滕堡，許多婦女由於計劃搬遷而被排除在前瞻性研究之外。當前瞻性研究因資金短缺而提前結束時，隨訪的完成受到阻礙，但隨訪到研究終止時的保留率為88.6%，中位觀察時間為4.1人月，總PY為67.1。

在兩個地點進行橫斷麵篩選的參與者中，很大比例的參與者年齡≤21歲，具有高中水平教育，未就業，未婚並與家人住在一起( 表1)．大約三分之一的婦女在每個地點使用了有效的避孕方法(激素法或宮內節育器:布隆方丹38.3%，勒斯滕堡32.9%; 表1)．沒有進行性傳播感染檢測;基線時自我報告的性傳播感染體征/症狀的患病率在布隆方丹的2%至15%之間，在勒斯滕堡的22%至37%之間。

在基線時，布隆方丹研究中的女性比勒斯滕堡的女性自我報告的風險行為更多( 表1)．布隆方丹三分之二的婦女報告在橫斷麵篩查前一個月與兩個或兩個以上伴侶發生陰道性交;在勒斯滕堡，相應的比例為14%。布隆方丹市超過一半的婦女報告說，她們在前一周與主要伴侶發生過陰道性交而沒有使用避孕套，而在勒斯滕堡市約有四分之一的婦女報告說，她們在前一周與主要伴侶發生過無保護措施的性交。布隆方丹的女性也更有可能報告與非主要伴侶發生無保護措施的性行為。

進入前瞻性研究的婦女的基線特征與兩個地點源篩查人群的基線特征大致相似( 表1)，而且幾乎沒有跡象表明在未來的隊列中選擇了一個特定的亞組。

在布隆方丹橫斷麵篩查中，艾滋病毒患病率為21.2%(95%可信區間18.9%至23.6%)，總體而言:18-24歲的女性為13.4%，25-29歲的女性為38.1%，30-35歲的女性為37.1% ( 表2)．在勒斯滕堡，篩查時婦女艾滋病毒總體流行率為23.5%(95%置信區間19.9%至27.1%)，範圍從18-24歲的18.7%到25-29歲的31.8%到30-35歲的37.7% ( 表2)．

在兩個研究地點，三個基線因素與流行的艾滋病毒感染顯著相關( 表3):年齡在30歲或以上與18-24歲相比，受教育程度較低與較高，與孩子同居與不與孩子同居。隻有在布隆方丹，自我報告的性傳播感染體征或症狀與艾滋病毒有關，隻有在勒斯滕堡，不使用避孕措施與使用避孕套與艾滋病毒有關。性行為因素與流行的艾滋病毒感染沒有顯著關聯。

在Bloemfontein隊列的前瞻性研究中觀察到9種血清轉換，總發生率為5.5/100 PY (95% CI 2.5 ~ 10.4; 表4)．18-24歲女性的發病率為5.7/100 PY (95% CI 2.3 ~ 11.7)， 25-29歲女性的發病率為4.2/100 PY (95% CI 0.1 ~ 23.5)，稀疏的30-35歲年齡組為5.8/100 PY (95% CI 0.2 ~ 32.2)。

在Rustenburg隊列中檢測到兩種血清轉換，總發生率為3.0/100 PY (95% CI 0.4 ~ 10.8; 表4)．兩種血清轉換均發生在18-24歲年齡組，較年輕年齡組的發生率為4.0/100 PY (95% CI 0.5 ~ 14.5)。

在這兩個地點發生的11起艾滋病毒感染事件中，有10起顯然發生在預期階段的報名之後。布隆方丹的一個血清轉換問題更大;橫斷麵快速檢測為陰性，PCR未檢測到存儲標本中的病毒，但Western blot結果為陽性，並持續陽性，直到3個月隨訪時血清轉化。排除該布隆方丹患者後，重新計算的布隆方丹發病率為4.9/100 PY (95% CI 2.1至9.6)。

Bloemfontein隊列中有9例新感染病例，我們使用流行感染風險因素分析中包含的相同因素進行單因素比例風險回歸(如上)。沒有任何因素與意外感染顯著相關。上個月與非主要伴侶的一次或多次無保護的性交行為與艾滋病毒事件的關聯最強(HR=6.7;p = 0.07)。

橫斷麵篩查時，布隆方丹的妊娠患病率為6.5% (95% CI 5.0%至7.9%)，勒斯滕堡的妊娠患病率為8.6% (95% CI 6.2%至10.9%)。(關於勒斯滕堡妊娠結果的進一步分析將在其他地方發表。)在布隆方丹，未使用避孕方法的篩查婦女懷孕率為11.0%(95%可信區間8.5%至14.0%)，使用避孕套的婦女懷孕率為3.5%(95%可信區間1.3%至7.5%)，使用有效避孕方法(激素和宮內節育器)的婦女懷孕率為2.1%(95%可信區間0.9%至3.9%)。布隆方丹妊娠發生率為16.4/100 PY (95% CI 10.8 ~ 23.9)，使用避孕套的婦女在基線時不使用避孕方法的婦女在27.6/100 PY (95% CI 17.1 ~ 42.2)之間，在使用有效避孕方法(激素或IUCD)的婦女在12.4/100 (95% CI 2.6 ~ 36.4)和4.7/100 (95% CI 1.0 ~ 13.7)之間。