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目標基因變異的核factor-κB (NF-κB)信號通路被發現與炎性疾病和一些惡性腫瘤有關。然而,很少有人知道NF-κB通路基因多態性與肝癌的易感性。本研究的目的是調查是否遺傳變異的NFKB1和NFKBIA與肝癌的風險有關中國人口。
設計這項研究是設計成嵌套在兩前瞻性病例對照研究群體(上海女性健康研究中,片,1996 - 2000年和上海男人的健康研究,SMHS, 2002 - 2006)。
設置這個以人群為基礎的研究在城市上海,中國。
參與者217事件診斷肝癌病例在2009年12月31日和427名健康對照匹配按性別、年齡基線(±2年)和日期(±30天)的樣本集合包含在這項研究。
主要和次要結果的措施基因多態性的NFKB1和NFKBIA測定TaqMan盲目的單核苷酸多態性(SNP)基因型分析。或及其95%獨聯體被無條件邏輯回歸模型來估計測量選定的單核苷酸多態性之間的關係和肝癌的風險。
結果調整潛在的混雜因素後,rs28362491 ins / del或del / del基因型與肝癌的風險更高,有關調整或1.54 (95% CI 1.04 - 2.28)。rs230496 AG)和GG基因型也指出了肝癌的風險更高,調整或1.53 (95% CI 1.03 - 2.26)。單體型分析表明航空公司的NFKB1GA和AA (rs230525-rs230530)單肝癌相加模型下的風險更高。沒有觀察到協會之間NFKBIA變異和住癌症的風險。
結論我們的研究結果表明,遺傳變異NFKB1在中國人口影響肝癌易感性,盡管複製在其他的研究是必要的。
- 流行病學
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本研究的優點和局限性
這項研究是第一個以人群為基礎的研究評估核Factor-κB的多態性變異和肝癌的風險。
隻有事件的情況下從兩個未來的戰友都包括在研究排除了回憶和選擇性偏差的可能性。
這項研究的限製包括樣本容量相對較小,無邊無際的乙型肝炎病毒(HBV)感染丙型肝炎病毒(HCV)感染和黃曲黴毒素暴露。然而,我們考慮了參與者的肝炎和肝硬化的曆史,盡管存在丙肝病毒感染和人口研究中黃曲黴毒素很低。
介紹
肝癌是一種常見的疾病在世界範圍內排名第五和第七男性和女性中最常見的癌症。據估計,超過80%的肝癌發生在發展中國家,約54%發生在中國。1在肝癌的主要風險因素,慢性感染乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)是最重要的對於人類來說,占全世界肝癌病例的70%以上。2 - 4肝硬化、重型飲酒,接觸黃曲黴毒素和糖尿病也占一部分肝癌的發生。2 - 4
慢性炎症被廣泛接受在hepatocarcinogenesis發揮重要作用。大多數肝癌的已知風險因素如乙肝病毒、丙肝病毒感染和飲酒會導致肝髒持續的炎症反應,促進癌症發展。5,6然而,連接炎症和肝癌的分子和細胞機製尚不清楚。最近的研究結果表明,核factor-κB (NF-κB)可能起到至關重要的作用在彌合增長的行為因素對肝腫瘤發生和慢性炎症。7 - 10
NF-κB,二聚的轉錄因子的集合,最初被確定為綁定到一個核因素增強免疫球蛋白κ-light鏈的基因11特定於B細胞和禮物在所有類型的細胞。12它是一個主要的轉錄監管機構免疫反應,細胞粘附、分化、增殖和凋亡。13NF-κB二聚體是由七個不同的蛋白質:NF-κB1(施敏原著和p50), NF-κB2 (p100和p52), RelA (p65) RelB:,其中NF-κB p50 / RelA是最常見的二聚體形式。9在靜息細胞,大多數NF-κB二聚體被綁定到特定的滅活在細胞質中抑製劑:IκB家族,其中IκBα是最常見的一個。在經典激活途徑,IκB由IκB激酶磷酸化和退化的複雜,然後NF-κB二聚體釋放,把核協調目標基因的轉錄激活。14的幾個基因變異NF-κB信號通路已報告與乳腺癌等癌症風險有關,15前列腺,16胃,17colorectum18和嘴。19然而,很少有人知道的角色NF-κB基因的遺傳多態性和肝癌易感性。
在以人群為基礎的病例對照研究中嵌套在兩組未來的上海女子(片)和男性健康研究(SMHS),我們調查的基因變異之間的關係NFKB1和NFKBIA,兩個關鍵基因在NF-κB經典信號通路,和肝癌的風險在中國男人和女人。
材料和方法
研究人群
本研究的參與者來自片和SMHS。這兩項研究中使用的設計和方法詳細描述了其他地方。20短暫,片招收了74名40 - 74歲的941名女性在1997年3月1日和2000年5月31日之間,與92.7%的反應率。SMHS招收了61名40 - 74歲的491名男性沒有曆史的癌症招聘從2002年4月1日到2006年6月30日,與74.1%的反應率。相關的機構審查委員會批準的研究都是對人類的研究在中國和美國,和一個從所有參與者獲得的書麵知情同意。
麵對麵的采訪是由受過訓練的麵試官在基線使用結構化的問卷來獲取關於人口的信息,生活方式,飲食習慣,病史和其他特征。人體測量,包括當前的體重、身高和周長的腰部和臀部,也測量。合格的參與者,56 831片(75.8%)和46 332(75.3%)提供的SMHS 10毫升血液樣本在基線。樣本加入EDTA真空采血管管,然後保存在一個便攜式塑料盒子,冰袋(大約在0 - 4°C)和加工在6 h為長期儲存−70°C。biospecimen集合形式完成了每個參與者的樣品采購,包括收集的日期和時間,最後一餐,和最後的月經日期,選擇食品的攝入量,吸煙,以及使用任何藥物前24小時和在前一周。
隊列隨訪和結果確定
軍團都跟著發生癌症和其他慢性疾病的活動現場調查每2 - 3年的年度記錄鏈接到數據庫基於上海癌症登記處,上海人口動態統計注冊中心和上海居民注冊表。片,四個輪現場跟進完成,和響應率第一(2000 - 2002),第二個(2002 - 2004),第三(2004 - 2007)和第四(2008 - 2011年)隨訪調查有99.8%,98.7%,分別為96.7%和92%。SMHS的兩輪隨訪調查完成。第一反應率(2004 - 2008)和第二(2008 - 2011年)隨訪調查分別為97.6%和93.6%,分別。群組成員發達肝癌在隨訪期間,綜述了醫學圖表由一個腫瘤專家小組來驗證診斷。肝癌的數據截至2009年12月31日是用於本研究。
包含在這個嵌套病例對照研究217事件肝癌病例和427名對照組捐獻的血液樣本。肝癌病例定義為擁有一個國際疾病分類的第九次修訂(ICD-9) 155.0規範(主要惡性腫瘤),155.1(肝內膽管惡性腫瘤)或155.2(未指明的肝髒的惡性腫瘤)。24兩組控製受試者被隨機選擇從捐贈的血液樣本在基線和匹配性,年齡基線(±2年)和日期(±30天)的樣本集合。所有控件沒有任何癌症的癌症診斷時的相應情況。
基因分型
選擇單核苷酸多態性(SNP)是基於標記SNP及其假定的功能意義。選擇標記snp通過搜索漢人從人類基因組單體型圖計劃數據。25以下標準被用來識別標記snp:(1)單核苷酸多態性位於基因或5 kb側翼區域內,(2)一個小等位基因頻率≥0.05,(3)其他未經選擇的單核苷酸多態性可以捕捉到的一個標記snp r的連鎖不平衡2≥0.90。總共有八個snp基因分型結果選擇rs28362491, rs230530 rs230525, rs230496NFKB1,rs3138055 rs3138053 rs2273650, rs696NFKBIA(表1)。基因組DNA提取使用Promega從巴菲外套DNA提取工具根據製造商的指示(Promega公司,麥迪遜,威斯康辛州,美國)。TaqMan基因分型結果進行的分析,使用ABI 7900棱鏡ht序列檢測係統(應用生物係統公司,培育城市,加利福尼亞,美國),在384 -格式,具有雙重熒光記者調查維克和家人。rs28362491使用專門設計的探針和引物的基因。引物序列是:5′-GCCTCCGTGCTGCCT-3′(正向引物),3′-AGGGAAGCCCCCAGGAA-5′(反向引物)。探針序列是:5′-TTCCCCGACCATTGG-3′(del) 5′-CCGACCATTGATTGG-3′(ins)。其他snp基因分型用預先設計分析(應用生物係統公司)。基因分型結果的質量和潛在的錯誤分類結果評估評估5%重複的DNA樣本,從整個樣本中隨機選擇的。他們複製整合了100%。所有血清樣本測試盲目,隻被確定通過一個獨特的識別號碼失明病例對照狀態。
統計分析
主題與調查數據和基因分型結果包含在最終的分析中。手段和百分比,病例組和對照組選擇特征計算。選定的分布特征之間的比較情況下和控製通過學生t測試(連續變量)或χ2測試(分類變量)。或及其95%可信區間估計無條件的邏輯回歸模型來衡量選擇的單核苷酸多態性之間的關係和原發性肝癌的風險。在多變量分析中,潛在的混雜因素調整,其中包括年齡(連續變量);教育水平(四類:小學,初中,高中和大學或以上);肝炎史(是或否);肝癌家族史(是或否);和其他慢性肝髒疾病史或肝硬化(是或否)。使用SAS軟件包進行統計分析(V.9.2;SAS研究所,北卡羅來納州卡裏)。測試趨勢進行通過輸入分類變量和連續變量的回歸模型。 All p values were calculated by two-sided tests and were considered statistically significant if p value was less than 0.05.
哈迪溫伯格平衡和連鎖不平衡是訪問HaploView V.4.0。26之間的聯係單和肝癌的風險評估HAPSTAT V.3.0使用最常見的單體型類別作為參考,假設一個加法模型。27
結果
選擇研究參與者的基線特征表2。病例和控製的平均年齡分別為59.61和59.47,分別。與控製相比,肝癌病例更可能有一個較低的教育水平、肝炎、肝癌家族史的一級親屬和慢性肝髒疾病史或肝硬化。此外,男性肝癌更可能有較低的身體質量指數和非正式鍛煉者與控製相比,盡管在臨界意義的區別。而在女性,情況更有可能比控製2型糖尿病史。沒有觀察到的差異在家庭收入、吸煙、飲酒習慣,腰臀比和其他癌症家族史的兩組。
的關聯NFKB1單核苷酸多態性與肝癌風險總結表3。rs28362491的基因型,rs230530 rs230525顯示,沒有偏離哈迪溫伯格平衡控製rs230496除外。為潛在的混雜因素調整之後,rs28362491 ins / del或del / del基因型與更高的風險有關的肝癌或1.54 (95% CI 1.04 - 2.28)。rs230496 AG)和GG基因型也指出了肝癌的風險更高,調整或1.53 (95% CI 1.03 - 2.26)。運營商rs230525 AG)或GG基因型肝癌的風險增加約30%,但風險是微不足道的。沒有發現協會rs230530和肝癌風險之間的關係。
表4禮物的分布NFKBIA單核苷酸多態性在病例和控製。rs3138055的基因型,rs696 rs2273650顯示,沒有偏離哈迪溫伯格平衡控製但rs3138053。一般來說,所有的四個單核苷酸多態性與肝癌沒有關係。
我們進一步分析了這些snp的單體型與肝癌的風險(表5)。為NFKB1基因,兩個單核苷酸多態性(rs230525和rs230530)展示了強大的連鎖不平衡(D′= 1.0, r2= 0.59)。與男性攜帶rs230525-rs230530 AG)單體型相比,那些有遺傳算法或AA單在顯著增加肝癌的風險調整口服補液鹽1.46 (95% CI 1.05 - 2.03)和1.81 (95% CI 1.15 - 2.86),分別。為NFKBIArs3138053 rs2273650在連鎖不平衡(D′= 0.97, r2= 0.31),但沒有明顯的單體型與肝癌有關。
討論
在這個嵌套病例對照研究中,我們發現rs28362491和rs230496的變體NFKB1基因可能與原發性肝癌的風險。為可能的混雜因素調整後,rs28362491刪除allelle rs230496 AG)或GG基因型被發現增加肝癌的風險。此外,單體型分析表明航空公司的NFKB1GA和AA (rs230525-rs230530)單加性模型下肝癌的風險更高,盡管這種聯係隻是觀察到男性。這些發現表明,變異的NF-κB信號通路可能在肝癌易感性中發揮作用。
NFKB1染色體上基因映射4 q23-q24和24個外顯子組成。28這個基因編碼施敏原著非dna結合蛋白。作為一個不活躍的前體,它被激活p50, proteasome-mediated退化的DNA結合蛋白。一些基因多態性中定義NFKB1,-94年研究一直集中在一個共同的多態性del / ins (rs28362491)啟動子區域。最近的研究表明,遺傳多態性的rs28362491與許多癌症風險包括零星的乳房,15前列腺,16胃,17結直腸18和口腔癌症,19但對其與肝癌的關係。他等進行了病例對照研究202例肝細胞癌(HCC)的乙肝病毒載體和404名健康對照沒有乙肝病毒感染。29日結果表明,年齡和性別進行調整後,-94年ins /德爾和ins / ins基因型可能會增加肝癌的風險,與口服補液鹽1.60 (95% CI 1.01 - 2.53)和3.01 (95% CI 1.87 - 4.85),分別。來自台灣的報告還發現ins等位基因在肝細胞癌患者比較普遍(或= 2.23,95%可信區間1.32到3.77)。30.在我們的研究中,我們發現ins /德爾和德爾/ del基因型比控製在肝癌病例更為普遍。是觀察rs28362491多態性與癌症協會和研究人口與癌症易感性不同的網站。據報道,Ins等位基因增加口腔癌的危險,31日黑色素瘤,32前列腺癌,16胃癌,17鼻咽癌33和子宮頸癌。34在歐洲人口的兩項研究發現,德爾等位基因可能會增加結直腸癌的風險,35,36在中國人口,甚至扭轉協會沒有獲得。35,37多態性的差異可能會造成相互作用或與非遺傳性危險因素的聯合效應。精心設計的研究需要更大的樣本量來驗證這些發現。
我們所知,這是第一個報告rs230496的變體,rs230525和rs230530肝癌易感性。在歐洲美國血統的一項研究發現rs230530多態性與酒精依賴,和證據主要來自那些酗酒的標準。38酒精是肝癌的主要危險因素之一,rs230530可能發揮作用在酒精相關的肝癌。不幸的是,相對較小的樣本大小的限製,我們無法探究這個問題。此外,盡管intronic snp的功能仍然模糊,研究已經表明,他們能夠影響當地的DNA或RNA二級結構,從而調節基因表達。39,40
NFKBIA基因,編碼IκBα的抑製劑NFKB1被映射到14問題有六個外顯子跨越大約3.5 kb。41IκB家族的主要組件,功能障礙或向下調節IκBα將導致超過NF-κB的激活。流行病學研究NFKBIA相對少見。2758克/ polymorphysim (rs696) 3′未翻譯區可能調節IκBα的表達,從而影響NF-κB的激活。太陽和他的同事們發現AG基因型頻率增加中國患者≥50歲(或= 3.06,95%可信區間1.55到6.02)和結腸直腸癌。42另一項研究對乳腺癌未能獲得重大協會。15沒有以前的報告rs696和肝癌的風險。
的四個單核苷酸多態性NFKBIA基因評估,我們沒有觀察到顯著的關聯。在先前的研究中,rs3138053變種被發現與肝癌有關在中國大陸的人口29日但不是台灣人。30.
我們的研究有幾個優勢。本研究是基於兩個精心設計的前瞻性群組研究。我們所知,這是第一個基於人群的研究評估NF-κB的多態性變異和肝癌的風險。所有參與者都是華人和相似的遺傳背景,上海的居民,由於倫理學最小化潛在的混淆。隻包含事件情況下,排除了回憶和選擇性偏差的可能性。肝癌病例仔細核實與多種方法最小化錯誤分類的疾病。同時,我們在分析控製潛在的混雜變量。我們的研究也應該指出的局限性。首先,我們隻關注兩個基因參與NF-κB的規範化途徑,其他監管NF-κB中的基因信號通路也可能導致肝癌的發病機製。第二,我們沒有檢測乙型肝炎病毒感染丙肝病毒感染或黃曲黴毒素暴露,所以我們不能排除可能導致混淆,盡管存在丙肝病毒感染和黃曲黴毒素很低人口的研究中,43但是我們確實考慮參與者的肝炎和肝硬化的曆史。最後,由於樣本量相對較小,一些純合子變異的頻率較低的子組,因此減少了統計能力和有限的我們從評估分層分析的聯合效應。複製在其他的研究是必要的。
總之,在這個嵌套病例對照研究中,我們提供了額外的證據NF-κB snp的作用和單在肝癌的病因學。研究在較大,變化多是必要的來證實這些發現。此外,功能性研究需要為了探索底層機製。
確認
我們要感謝上海男性健康研究的參與者和上海女性健康研究這項工作的寶貴的貢獻。
引用
腳注
貢獻者Y-BX獲得資金,開發研究設計,起草了手稿,解釋結果,並也有主要責任最終內容;WZheng和X-OS設計、導演和獲得資金家長群,並導致結果的修正和解釋;詹獲得資金的一部分,起草了手稿,分析數據和解釋結果;詹和H-LX進行實驗;所有作者批判性審查和批準了手稿。
資金這項工作得到了國家重點項目的資金專門為中國傳染病(2008號zx10002 - 015、2012號zx10002008 Y-BX - 002)。父戰友都支持的資助(R37 CA070867 W鄭,R01 CA82729 X-OS)來自美國國立衛生研究院。詹的努力的一部分的研究已經被研究項目支持上海市衛生局(No.2008208)。
相互競爭的利益一個也沒有。
倫理批準範德比爾特大學癌症研究所IRB IRB和上海。
出處和同行評議不是委托;外部同行評議。
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