條文本
PDF
文摘
目標本研究旨在檢測α-和β-thalassaemia突變Jino雲南省少數民族人口,中國西南地區。
設計1613 Jino成人不斷招募了2012年2月到2012年4月。空腹靜脈血樣本獲得確定血液學的變量。血紅蛋白用高效液相色譜法進行分析。積極參與者與淺色小紅細胞的貧血或血紅蛋白分析資料經αβ-globin基因測試,包括DNA微陣列分析、直接測序方法和多路gap-PCR化驗。
設置糖尿病糖尿病研究所、上海重點實驗室,上海交通大學附屬第六人民醫院。
結果我們發現363例疑似病例,主要血液學的變量的篩選和血紅蛋白分析。經過進一步的基因測試,四種類型的α-和β-thalassaemia突變檢測在203 363人。兩個α0- - -α+地中海貧血突變,海和-α3.7,被確定。β-Thalassaemia突變包括CD17 (HBB: c.52A > T)和CD26 (HbE或HBB: c.79G >)。此外,13 HbE運營商共存α0或α+地中海貧血刪除。臨床血液學的變量表示,在這項研究中,所有thalassaemic基因型攜帶者比non-thalassaemic個人更嚴重的淺色小紅細胞的貧血。
結論我們的研究結果提供信息,Jino少數民族可以用於進一步的遺傳谘詢,產前篩查和本地區地中海貧血的臨床診斷。
- 流行病學
這是一個開放的分布式條依照創作共用署名非商業性(4.0 CC通過數控)許可證,允許別人分發,混音,適應,建立這個工作非商業化,和其派生作品在不同的條款進行許可,提供了最初的工作是正確地引用和非商業使用。看到的:http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
來自Altmetric.com的統計
本研究的優點和局限性
Jino,最後確認少數民族在中國,據報道,地中海貧血患病率較高根據先前的研究在10歲以下的兒童,本研究旨在檢測突變的α-和β-thalassaemia Jino成年人。
所示的α-和β-thalassaemia突變譜這一研究可能有助於解釋進一步genotype-phenotype相關性和建立thalassaemia-prevention計劃在這一領域。
我們用於基因檢測的樣本大小是相對較小,可能沒有有效性識別罕見的在這個族群地中海貧血。
介紹
作為一個群體的單基因疾病,地中海貧血是一種嚴重的健康問題在世界範圍內,尤其是在地中海地區、東南亞和中國南部。1 - 3雲南,位於China-Myanmar-Laos的邊境地區,值得注意的是它的種族多樣性。根據10歲以下兒童的一項研究,一些少數民族在這個地區地中海貧血患病率高,α-thalassaemia的患病率最高(α-thal)(22.1%)從西雙版納傣族的患病率β-thalassaemia(β-thal) Achang最高(40.6%)。4
Jino是最後確認少數民族在中國,α-thal的患病率和β-thal Jino兒童是3.1%和29.3%,分別。Thalassaemic兒童可能出現各種臨床症狀;有些是無症狀攜帶者,而其他人則嚴重的溶血性貧血。5需要輸血治療,嚴重的運營商,對家庭沉重的負擔和公共衛生管理。6雖然遺傳篩查是必要的預防和控製這種遺傳疾病,係統性的調查地中海貧血突變Jino成年人是罕見的。
Jino人口包括近20 000人,大多數(∼90%)生活在Jino山,位於雲南省東部地區。7大量thalassaemic突變被發現在全世界普通人群;8 - 10然而,很少有人知道這個孤立的人口。的確,地中海貧血的分子機製和遺傳變異Jino個人可能不同於其他種族。我們的研究旨在檢測α-thal和β-thal基因突變Jino成年人提供基本信息進行進一步的產前谘詢和地中海貧血的診斷。
材料和方法
參與者和臨床篩查
研究倫理批準授予根據赫爾辛基宣言》(第二段)的機構審查委員會的上海交通大學附屬第六人民醫院,上海,中國。之間的橫斷麵研究2012年2月和2012年4月在八個村莊(Luote、Jiama Balai,原地,新的原位,白癡,Baya,大屏障)周圍Jino山在景洪,雲南省南部,中國(圖1)。列表Jino成年人從這八個村莊得到當地村民委員會辦公室。參與者被取樣的一個簡單的電腦程序隨機從這些村莊。員工在當地的醫療中心,了解中國和Jino語言,聯係研究對象,介紹了研究的目的。口頭和書麵的知情同意是獲得所有的個人。基本的人口統計信息和空腹靜脈血樣本收集的研究人員。
地理位置的Jino雲南省少數民族人口,中國西南地區。固體黑色三角形代表Jino山。固體黑色圓圈代表八個村莊在景洪的1613名被試被隨機選中。
1613 Jino成年人,包括762名男性和851名女性,參與這個調查(血液學的和總人口的人口學特征包括在這項研究中給出了表1)。以下血液學的變量測量:血紅蛋白(Hb)、平均微粒體積(MCV),意思是微粒血紅蛋白(婦幼保健),紅細胞(RBC)和紅細胞分布寬度(RDW)。血紅蛋白的高效液相色譜(HPLC)分析了使用變體II血紅蛋白分析係統(美國加州Bio-Rad實驗室、大力神)。α-β-globin基因測試執行與淺色小紅細胞的參與者(n = 363)貧血(MCV < 80 fl和/或婦幼保健< 27個pg)和/或積極高效液相色譜配置文件。為了評估的有效性主要地中海貧血的篩查方法檢測運營商,我們隨機選擇一些個人的負麵篩選結果(n = 50)從剩下的參與者(n = 1250)進行進一步的基因測試。
基因檢測
從靜脈血液白細胞基因組DNA提取。三種方法被用來檢測thalassaemic突變。
CapitalBio地中海貧血基因突變檢測設備(CapitalBio,北京)是用來確定25常見球蛋白基因突變在中國人口通過DNA微陣列。六19β-thalα-thal基因突變和基因突變被包括在內。其中,有三個α-thal缺失,東南亞刪除(-海向右)、刪除(-α3.7)和左傾刪除(-α4.2)——三non-deletionalα-thal突變,Hb常數春天(HBA2: c.427T > C), Hb Quong施鵬翔(HBA2: C。377 t > C或HBA1)和Hb威斯特(HBA2: c.369C > G)。19β-thal基因突變是CD14/15 (HBB: c.45_46insG) CD27/28 (HBB: c.84_85insC) CD41/42 (HBB: c.126_129delTCTT) CD71/72 (HBB: c.216_217insA), -32 (HBB: C - 82 T > C), -30 (HBB: C - 80 T > C), -29 (HBB: C - 79 A > G), -28 (HBB: C - 78 A > G), CD17 (HBB: c.52A > T) CD26 (HBB: c.79G >), CD30 (HBB: c.91A > G), CD37 (HBB: c.113G >), CD43 (HBB: c.130G > T) IVS1-1 (HBB: c.92 + 1 G > T), IVS1-5 (HBB: c.92 + 5 G > T), IVS2-5 (HBB: c.315 + 5 G > C), ivs2 - 654 (HBB: c.316 - 197 C > T), Int (HBB: c.2T > G),帽(HBB: c.-11_-8delAAAC)。BioMixer II微陣列雜交站(CapitalBio)複合PCR擴增後用於雜交。然後,芯片使用LuxScan 10 k-b芯片掃描儀進行掃描(CapitalBio)。
驗證β-thal突變,三個β-globin基因的片段被放大。第一個片段是放大5′有條件現金援助亞美大陸煤層氣有限公司CCA GTG CCA棉酚咽頸- 3′正向引物和5′tgc CCA GTT TCT ATT GGT CTC頸- 3′反向引物,第二個片段是放大5′標簽AAA CTG GGC ATG TGG AG-3′正向引物和5′tgt ACC CTG TTA CTT ATC CC-3′反向引物,和第三個片段是放大5′檸檬酸GGG CAA TAA TGA TAC AA-3′正向引物和5′-TTA GTA GTT GGA CTT gg GA-3′反向引物。片段的測序基因分析儀使用3500(應用生物係統公司,培育城市,加利福尼亞,美國)。
我們還證實三α-thal缺失,東南亞刪除(-海向右)、刪除(-α3.7)和左傾刪除(-α4.2)—使用多路複用gap-PCR化驗。引物PCR條件設計在文獻中所描述的。11,12
統計分析
使用SAS統計分析進行了Windows (V.9.2)。所有定量特征檢測正常,傾斜的定量特征是對數轉換為近似正常單變量。數據顯示為±SD方法。量化特征(紅細胞,Hb, MCV、婦幼保健、RDW)使用Wilcoxon測試兩組之間的比較,並進行方差分析比較三組的差異地中海貧血運營商(α-Thal,β-Thal和αβ-Thal)。雙尾統計學意義被認為是在p < 0.05。
結果
突變中確定Jino
由於在不同的球蛋白基因突變,我們觀察三組thalassaemic運營商,包括個人隻有α-thal基因缺失或β-thal基因突變和個人聯合αβ-thalassaemia(αβ-thal)基因突變。四個不同的地中海貧血突變被發現在203人中363例疑似病例。沒有觀察到突變50個人負主要篩選結果。表2顯示了α-和β-thal突變的等位基因頻率在我們的研究中發現的。
α-thal基因的突變
所有的三種常見non-deletionalα+需要突變,Hb常數春天(HBA2: c.427T > C), Hb Quong施鵬翔(HBA2: C。377T>C (or HBA1)) and Hb Westmead (HBA2:c.369C>G), were found in 203 participants with thalassaemia mutations. Forty-six of 203 participants carried α-thal deletions only; --海和-α3.7觀察,占16.7%(34/203)和5.9%(12/203)的突變,分別。在這些個人中,我們確定了兩個α+/α,α+/α+對於-α3.7和α0/α-海(凝膠電泳的PCR擴增結果所示圖2)。但是,沒有-α4.2刪除被觀察到。
凝膠電泳的PCR擴增結果α-thal刪除。M,標誌,200個基點DNA梯;向右車道1,刪除(基因型-α3.7/ -α3.7);向右車道2和3,刪除(-α基因型3.7/αα);東南亞航線4和5,刪除(基因型—海/αα)。
β-thal基因的突變
我們觀察到的突變CD17 (HBB: c.52A > T) (圖3)和CD26 (HbE或HBB: c.79G >) (圖4)。CD17,占9.9%(20/203)的突變,被發現β0/β一個在這個人口。參與者與HbE變體,βE/β一個或βE/βE,占61.1%(124/203)的突變。此外,13 HbE運營商懷有—海(n = 8)或-α3.7(n = 5)聯合頻率為6.4% (13/203)。
雜合的CD17 (> T)基因突變(A)和相應的正常β-globin序列。紅色箭頭指示的位置點突變。
雜合的CD26 (G >)突變(A)和相應的正常β-globin序列。紅色箭頭指示的位置點突變。
血液學的特性不同的地中海貧血基因型
總結了血液學的數據不同的地中海貧血基因型表3。與正常個體相比,thalassaemic運營商Hb顯著減低,MCV和婦幼保健水平(分別p < 0.001),紅細胞和RDW水平較高(p < 0.001,分別)。此外,我們比較三組之間的差異在這五個指標的航空公司(α-thal,β-thal和αβ-thal)。”顯著差異(p = 0.0111),婦幼保健(p = 0.0002)和紅細胞(p = 0.0012)觀察這些團體之間。MCV和婦幼保健水平α-thal組明顯低於β-thal組(p < 0.05),而紅細胞水平較高(p < 0.05)。相比之下,沒有區別觀察αβ-thal和α-thal組/β-thal組。此外,有一個傾向增加α-thal RDW水平組相比β-thal組(p = 0.0573)。
討論
地中海貧血是一種常見的單基因疾病流行在東南亞相對較高。在中國,這種病主要流行在長江南岸附近的地區,如廣東、廣西、福建和雲南。13 - 15產前篩查和相關分子診斷預防和治療地中海貧血是至關重要的。許多研究已經在雲南省進行地中海貧血。16,17然而,Jino人口數據是有限的,因為這是最後一個少數民族人口在中國確認。
我們隨機選擇來自八個村莊的1613名成年Jino Jino山在景洪,雲南南部。在確定的基因突變中,最普遍α-thal和本地區β-thal基因型—海和HbE協議從雲南省與先前的數據。18,19根據我們的結果,整個地中海貧血患病率在Jino近12.6%,這類似於普遍觀察到昆明。20.αβ-thal患病率(8%)在我們的人口是等於在海南省人口(7.99%)、地中海貧血患病率高。21雖然雲南省與不同基因型地中海貧血患病率高,Jino人口球蛋白基因突變的光譜相對有限。
HbE,血紅蛋白病的一種,可以觀察到在中國東南部的大部分地區。22由於β-globin基因的點突變,平衡各種球蛋白產品中斷,導致結構性血紅蛋白變體。盡管HbE運營商可能隻有輕微的貧血,他們的後代將表現出嚴重的臨床症狀的其他β-thal類型。23因此,潛在的HbE運營商應該接受基因檢測和產前谘詢。經常使用高效液相色譜作為一種高效的初級篩選方法來檢測異常Hb,是在這項研究中,先前的研究。24,25在我們的研究中,95.6%(131/137)的HbE運營商通過高效液相色譜法,和13的這些人相伴α-thal刪除。
不同的基因型導致不同的臨床表型。26我們發現thalassaemic運營商顯著降低MCV和婦幼保健水平。關於那些β-thal突變,MCV和婦幼保健水平顯著降低CD17運營商與HbE運營商相比,表明β-globin無義突變的基因導致更多的紅細胞損傷。淺色小紅細胞的貧血是溫和與β的個體E/β一個和α+/α與βE/β一個運營商。這個悖論可以解釋為α的變化這一事實——和β-globin連鎖店可能相互抵消,當兩種突變個體共存。因此,快速估計基於血液學的遺傳疾病的狀態變量是很困難的。因此,基因篩選α-和β-globin基因突變在潛在的父母是至關重要的,以防止新生兒嚴重缺陷。27
然而,在這項研究有一些局限性。首先,我們用於基因檢測的樣本大小是相對較小,可能沒有有效性識別罕見的地中海貧血從這個民族變體。第二,人口和家庭結構的調查並不表現在這項研究中,盡管α-thal和β-thal基因突變Jino少數民族中是很常見的。結果,進一步研究近親繁殖水平和血緣關係結構的揭示基因流,然後評估的潛在機製的發生和持久性α-thalβ-thal基因突變,尤其是α-thal共存和β-thal Jino個體內基因突變。
總之,本研究顯示α-和β-thal突變Jino雲南省少數民族人口。這些突變,—海和HbE最普遍α-thalβ-thal基因突變類型,分別。此外,數據基於臨床血液學的變量分析表明低小紅細胞的貧血症的嚴重程度與地中海貧血的基因型有關。我們的結果為進一步提供證據表明,可能是有用的遺傳谘詢、產前篩查和本地區地中海貧血的臨床診斷。
確認
我們感謝所有的參與者的無私奉獻。我們承認的嫻熟的技術支持護理和醫護人員臨床糖尿病中心在上海。
引用
腳注
貢獻者WJ CH構思和設計實驗。西南和RZ進行了實驗和分析數據。GX, YL、XH FuJ和FeJ材料和分析工具。SW準備這篇文章。CH和WJ修訂後的手稿。所有的作者都閱讀和批準這個手稿的最終版本。
資金這個經濟工作是由中國國家自然科學基金的資助(91331110)。
相互競爭的利益沒有宣布。
病人的同意獲得的。
倫理批準根據赫爾辛基宣言(第二段),研究倫理批準的機構審查委員會被授予上海交通大學附屬第六人民醫院,上海,中國。書麵和口頭知情同意是獲得所有的參與者。
出處和同行評議不是委托;外部同行評議。
數據共享聲明沒有額外的數據是可用的。