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協會內皮脂肪酶基因−384 a / C與冠狀動脈疾病在漢族人民
  1. 梁謝1,2,3,
  2. 燕的太陽4,
  3. 於通3,5,
  4. 劉英3,6,
  5. 鄧應3,7,8
  1. 1兒科心髒病學係,中國西部第二大學醫院,四川大學,成都,四川,中國
  2. 2血管重建和發育缺陷的研究單位,中國西部婦女和兒童健康研究所、中國西部第二大學醫院,四川大學,成都,四川,中國
  3. 3重點實驗室的產科、婦科和兒科疾病和教育部的出生缺陷,中國西部第二大學醫院,四川大學,成都,四川,中國
  4. 4部門的泌尿學,天津泌尿外科研究所&天津泌尿基本醫學重點實驗室,天津醫科大學第二醫院,成都,中國
  5. 5實驗室的早期發展和傷害,中國西部婦女和兒童健康研究所、中國西部第二大學醫院,四川大學,成都,中國
  6. 6生殖醫學聯合實驗室,四川大學香港中文大學,中國西部第二大學醫院,四川大學,成都,中國
  7. 7國家出生缺陷監測中心,中國西部第二大學醫院,四川大學,成都,中國
  8. 8實驗室對出生缺陷的分子流行病學,中國西部婦女和兒童健康研究所、四川大學,成都,中國
  1. 對應到鄧博士應;yingdeng_dy {163.} com

文摘

目標內皮脂肪酶基因(LIPG)是一種重要的代謝基因的高密度脂蛋白膽固醇(hdl - c)和可能參與冠狀動脈疾病(CAD)的發病機理。

材料和方法調查之間的關係共同的單核苷酸多態性(snp) 584 C / T (rs2000813)和−384 a / C (rs3813082)LIPG基因和CAD、等位基因和基因型頻率的兩個單核苷酸多態性分析287年中國CAD病人和367個對照組的高分辨率融化曲線(人力資源管理)方法。

結果584 c / T多態性分布沒有顯著差異之間觀察到病人和控製。然而,C等位基因的頻率(20.2%比15%,p = 0.013, = 1.437, 95%可信區間1.078到1.915)−384 a / C在病人與對照組顯著增加。單體型分析還表明,單體型CT(12.37%比8.72%,p = 0.035, = 1.478, 95%可信區間1.034到2.112)明顯高於患者與控製。

結論這些結果表明,蘇格蘭民族黨−LIPG 384 a / C基因可能與CAD和風險LIPG基因可能在漢族在CAD中發揮作用。

  • 單核苷酸多態性(SNP)
  • 內皮脂肪酶基因(LIPG)
  • 協會

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本研究的優點和局限性

  • 結果表明,384 a / C−LIPG基因的變異可能是冠狀動脈疾病(CAD)的遺傳風險因素。

  • 有顯著變化的甘油三酯(TG)水平和總膽固醇(TC)水平在男性患者C等位基因的SNP−384 a / C比男性控製的個人。

  • 人口規模有限和未來的研究需要更大的人口規模來測試我們的結果。

介紹

冠狀動脈疾病(CAD)是死亡的主要原因之一。眾所周知,作為一種複雜的疾病,CAD是由於環境和遺傳病因論的決定因素。先前的研究表明,降低高密度脂蛋白膽固醇(hdl - c)和提高甘油三酯(TG)水平是眾所周知的疾病的發病的危險因素。1人們普遍認為高密度脂蛋白膽固醇水平與CAD的風險負相關。2至少80%的血液水平的高密度脂蛋白膽固醇水平在人類是由基因決定的。因此,研究人員感興趣的基因的變化調節高密度脂蛋白代謝,如肝脂肪酶(LIPC)、卵磷脂膽固醇酰基轉移酶(LCAT),膽甾醇酯轉運蛋白(CETP)和磷脂轉運蛋白(PLTP)基因。在過去的幾年裏,基因變異已係統地探索了一些倫理組織(綜述3)。

作為一個新成員的甘油三酯(TG)脂肪酶基因家族,內皮脂肪酶(EL),由內皮細胞合成,表達各種組織包括冠狀動脈,肝、肺、腎、卵巢、甲狀腺、睾丸和胎盤,已被確認。4EL股票45%、40%和27%同源的氨基酸序列與脂蛋白脂肪酶(LPL)、肝脂酶(HL)和胰脂肪酶(PL),分別。它使許多特征LPL、HL如催化三分子,heparin-binding網站,lipid-binding地區和半胱氨酸殘基酶活性所必需的。與LPL、HL EL顯示大量的磷脂酶活性,減少甘油三酯脂肪酶活性。然而,厄爾喜歡催化磷脂在高密度脂蛋白和扮演重要的角色在血漿高密度脂蛋白膽固醇水平的調節。4

內皮脂肪酶基因(LIPG)於1999年被克隆和特征兩個獨立不同的組。它位於染色體18 q12.1-q12.3,寬約30 kb 10個外顯子和編碼500個氨基酸的多肽。實驗,基因的超表達可以降低血漿高密度脂蛋白膽固醇濃度5 - 7及其抑製導致增加高密度脂蛋白膽固醇的水平。8,9同時,先前的研究表明,厄爾的負調節體內高密度脂蛋白膽固醇。8,10,11這些數據表明LIPG高密度脂蛋白膽固醇代謝中發揮了重要作用,可能是一個假定的CAD的預防和治療的新目標。因此,探索基因多態性之間的關係LIPG基因和CAD是很重要的。有幾項研究關注的共同變化LIPG基因。12 - 15其中常見的變化、384−> C (rs3813082)在啟動子區域與急性冠脈綜合征有關中國漢族和維吾爾族人群。16,17與此同時,另一個單核苷酸多態性(SNP) 584 c > T (rs2000813)外顯子3提出CAD在漢族人民的保護效應,13這是最近的一項薈萃分析的挑戰。18作為本研究結果相反,384−的頻率> C (rs3813082)和584 C > T (rs2000813)研究了CAD患者並與那些在控製為了探索可能的協會之間的兩個單核苷酸多態性和CAD在漢族人群。

材料和方法

主題

二百八十七年無關的CAD患者招募了來自西方的中國醫院,四川大學。診斷冠狀動脈造影證實了使用Judkins技術。個體擁有至少一個狹窄> 60%的冠狀動脈主要分支(左前降枝,左回旋支和右冠狀動脈)被限定為“CAD病人”。之前的沒有一個病人服用降血脂藥藥物血管造影術和脂質測量。此外,367人無關,無任何臨床或生化CAD的跡象,選擇通過在同一醫院健康檢查控製。知情同意是獲得所有的人在這個研究。

測定脂質和脂蛋白

收集血液樣本從病人和控製基線後一夜快。血漿分離細胞和脂質和脂蛋白分析立即使用。血漿總膽固醇(TC)水平,TG、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇(低密度脂蛋白)是由一個自動化學分析儀(日本奧林巴斯AU5400)與酶工具包(德國羅氏診斷GmbH)。

DNA製備、PCR擴增及基因分型

基因組DNA分離外周血白細胞的樣本使用DNA血液迷你包(試劑盒,德國)。引物設計與Primer3和合成表達載體(生活技術,美國)。引物序列所示表1。兩個snp檢測的多態性高分辨率融化曲線(人力資源管理)方法。PCR擴增和人力資源管理程序進行了在96 - 480年LightCycler孔板實時PCR係統(羅氏診斷,潘茨堡,巴伐利亞,德國)。

表1

基因多態性的引物序列。

PCR反應(10μL)包含20 ng的基因組DNA, 1.5毫米MgCl2,每個引物0.1μΜ(正向和反向),分別和2×LightCycler480高分辨率的主人混合融化(羅氏診斷,印第安納波利斯,印第安納州,美國)。進行PCR擴增為以下過程:初始變性在95°C,持續15分鍾,放大了45周期包括變性在95°C 10年代,退火60°C (62°C 584 C / A) 15和擴展在72°C 25年代。放大後結束,高分辨率的熔化曲線分析協議進行PCR產品以下過程:首先,變性在95°C 1分鍾1分鍾和冷卻到40°C;第二,逐漸增加的溫度從65°C到95°C的速度0.01°C / s;最後,儀器冷卻到40°C。後PCR擴增和融化曲線分析、數據分析到480 LightCycler基因掃描軟件V.2.0(德國羅氏診斷)。DNA樣本與已知基因型被用作參考樣本的人力資源管理分析兩個多態性。對於每一個SNP,添加了三個參考DNA樣本在每個運行。

PCR產品選擇和測序的部分融化曲線結果的驗證。測序引物是相同的用於pcr引物。核苷酸序列是由BigDye終結者V.3.1循環測序工具包,ABI 3130基因分析儀(應用生物係統公司)。

統計分析

等位基因和基因型頻率由計數。哈迪溫伯格平衡(HWE)與HWE軟件進行測試。19患者之間的差異基因型和等位基因分布和控製被χ評估2或確切概率測試(在適當的時候)。多元邏輯回歸分析評估或CAD在調整了其他因素。單核苷酸多態性之間的連鎖不平衡(LD)評估使用2 LD程序(http://www.iop.kcl.ac.uk/iop/Departments/PsychMed/GEpiBSt/software.shtml)。的單體型頻率估計階段的軟件20.,21(http://www.stat.washington.edu/stephens/software.html)。相對風險提出了口服補液鹽。連續變量的分布是用平均數±標準差表示。患者的脂質表型數據和控製比較學生t測試。

結果

列出了CAD患者的臨床資料表2。病人的人口統計和血脂水平和控製與CAD中列出表3。TC水平,高密度脂蛋白膽固醇和低密度顯著降低在CAD患者比控製,沒有統計上顯著的男性和女性之間的差異。

表2

CAD患者的臨床資料

表3

人口統計數據與CAD和血脂水平的病人和控製

表4顯示多態性的基因型和等位基因頻率−384 a / C和584 C / TLIPG基因與CAD患者和控製。兩個單核苷酸多態性基因型的分布在哈迪溫伯格平衡CAD和對照組(數據沒有顯示)。

表4

基因型和等位基因頻率分布−384 a / C和584 C / T多態性LIPG基因與CAD患者和控製

所示表4−384 a / C位點C等位基因攜帶者的頻率(AC + CC)明顯高於CAD患者比對照組(35.9%比27.2%,p = 0.018, = 1.495, 95%可信區間1.071到2.085)。然而,當調整年齡、性別、TC, TG,高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白,C等位基因的頻率的不同運營商之間的病人和控製不再是顯著(p = 0.071, = 1.524, 95%可信區間0.964到2.410)。

在584 c / T軌跡,沒有明顯的基因型和等位基因頻率的差異之間的病人和對照組觀察。按性別分層後,顯著差異在C等位基因頻率運營商(AC + CC)病人和對照組之間−384 a / C之間仍然存在在男性患者和控製(表5638.7%比29.6%,p = 0.045, = 1.502, 95%可信區間1.009到2.237)。然而,當調整年齡、性別、TC、TG,高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白,意義消失(p = 0.180, = 1.425, 95%可信區間0.849到2.390)。

表5

基因型和等位基因頻率分布−384 a / C和584 C / T多態性LIPG與CAD基因在男性患者,男性控製

表6

基因型和等位基因頻率分布−384 a / C和584 C / T多態性LIPG女性患者的基因與CAD和女性的控製

我們分析了血脂根據−384 a / C基因型與CAD患者和控製。沒有明顯差異在TG, TC,高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白水平之間的AA組和AC + CC組患者和控製,分別。然而,當按性別分層,顯著提高TG水平(p = 0.001)和TC水平明顯下降(p = 0.017)被發現在AC + CC組與AA組男性患者CAD、所示圖1

圖1

根據血脂−384 a / C基因型與CAD患者和控製。

自一個溫和的連鎖不平衡之間的觀察−384 a / C和584 C / T多態性在控製(D′= 0.3349),我們使用病例對照試驗對檢測階段之間的聯係單的兩個SNP位點和CAD患者。因此,單體型CT(12.37%比8.72%,p = 0.035, = 1.478, 95%可信區間1.034到2.112)顯著增加患者的CAD與控製(見表7)。

表7

LIPG單體型頻率與CAD患者和控製

討論

高密度脂蛋白代謝是複雜的和有利於CAD的病因學;因此,高密度脂蛋白代謝基因可能是潛在的目標為CAD的預防和治療。同時,先前的研究表明CAD的易感性40 - 60%是遺傳的,22現在已經有50個遺傳風險變化與CAD與全基因組關聯意義。23有些變化是附近的基因參與的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白代謝,如LPA,APOEANKS1A。因此,有必要探索之間的聯係新發現基因的遺傳變異LIPG和計算機輔助設計。然而,先前的研究結果的遺傳貢獻LIPG基因多態性是不一致的。12 - 15在我們的研究中,兩個多態性,−384 a / C在啟動子和外顯子3 584 C / T,選擇進行分析。選擇的原因是基因轉錄的啟動子的重要作用和潛在的非同義突變對基因功能的影響。此外,584 c / T是一個常見SNP在不同民族人口和重要的是檢查這個SNP的分布在不同的民族。

−384 a / C多態性LIPG與等位基因C, C等位基因頻率和運營商在CAD患者顯著高於控製,表明有一個協會之間的多態性和CAD, C等位基因可能增加對CAD的易感性。然而,當調整其他因素,運營商的頻率與等位基因C例和對照組之間不再顯著(p = 0.071)。原因可能是有限的人口規模在這項研究和個體的相對少量CC基因型(分別為13個和10個)。有限的人口規模可能會減少遺傳因素的影響,特別是當調整其他因素。相關的結果與之前的研究一致,這個SNP與急性冠脈綜合征在中國漢族和維吾爾族人群。16,17自從多態性位於啟動子區域,我們評估其可能影響轉錄通過搜索TRANSFAC數據庫6.0。我們發現−384 a / C位於轉錄因子LF-A1綁定的主題之一,它發揮了重要作用的轉錄載脂蛋白,A2, B1和A4在肝髒。24從A到C多態性的變化可能導致的損失綁定主題LF-A1,−384 A / C變化可能影響轉錄的LIPG。這是一個可能的原因為什麼CAD的多態性增加了風險。按性別分層參與者之後,協會C等位基因的頻率與CAD仍然觀察到男性,而不是女性,建議−384 a / C的影響變化的風險CAD男女之間可能會有所不同。但是,當我們分析了基因型脂蛋白的濃度分層,我們隻檢測到TG顯著增加,顯著降低TC AC / CC基因型組相比,AA基因型組,對高密度脂蛋白膽固醇水平沒有影響。EL屬於TG脂肪酶基因家族和其偏愛的襯底是高密度脂蛋白膽固醇,這裏的結果建議其他潛在通路,EL可以參加。

584 c / T,多態分布之間的觀察患者無顯著差異和控製,表明蘇格蘭民族黨並不與CAD相關聯。最近的一項薈萃分析的結果是一致的。18同時,蘇格蘭民族黨和高密度脂蛋白膽固醇的水平之間的聯係並不是在這項研究中發現患者和控製。2003年,馬et al。25發現這個SNP與高密度脂蛋白膽固醇等脂質參數之間的聯係在一個372人組成的群體與正常的膽固醇水平,但是協會是軟弱和沒有顯著關係這個SNP和進展或回歸觀察冠狀動脈病變的前瞻性研究。由Mank-Seymour給出結果26也來自一個前瞻性研究。然而,最近的結果顯示之間沒有聯係584 c / T和高密度脂蛋白膽固醇。14明顯的差異是最有可能的結果不同的研究設計。因為上麵的研究在健康人群中,執行是很重要的蘇格蘭民族黨和心血管疾病之間的關係進行調查。從我們的研究結果表明,沒有584 c / T對高密度脂蛋白代謝的影響在漢族人民。

連鎖不平衡以來−384 a / C和584 C / T不是很強,我們進行進一步的單體型分析兩個snp與CAD患者和控製。結果表明,單體型頻率在病人CT顯著增加,與控製相比,表明單體型CT可以CAD患者的危險因素,提供證據的變化LIPG可能參與對CAD的易感性。

盡管結果顯示蘇格蘭民族黨−384 a / C之間的關聯LIPG和CAD漢族人口,仍有一些局限性。首先,人口規模在這項研究是有限的。共有287名患者CAD和367控製中加入了個人的研究。第二,疾病表型沒有分成子類。脂質代謝的確切功能在各種CAD的發病機理尚不清楚,我們決定把所有類別的CAD和有一個積極的結果。第三,LIPG屬於TG脂肪酶基因家族及其首選襯底是高密度脂蛋白膽固醇;然而,蘇格蘭民族黨−384 a / C沒有與高密度脂蛋白膽固醇水平相關研究。原因可能在於補償其他脂酶。此外,TG, TC顯著差異的不同基因型組建議其他潛在的方式LIPG參加脂質代謝。

結論

我們所知,這是第一個病例對照研究協會的SNP−384 a / CLIPG與CAD漢族人口。我們的研究結果表明,−384 a / C的變化LIPG可能的遺傳風險因素CAD和進一步的功能分析說明的作用LIPG在CAD是必要的。

確認

這項研究是由中國教育部的資助”(313037),在大學長江學者和創新研究團隊項目“PCSIRT”(IRT0935),從四川省衛生部門研究項目(130114)和中國自然科學基金會(81401238)。

引用

腳注

  • LX和y同樣起到了推波助瀾的作用。

  • 貢獻者LX, y和碼的構思和設計實驗。LX, y和碼進行了實驗。LX、YL劉日東碼分析數據。LX, y和碼寫的論文。

  • 資金這項研究由來自中國教育部的資助(313037),在大學長江學者和創新研究團隊項目“PCSIRT”(IRT0935),從四川省衛生部門研究項目(130114)和中國自然科學基金會(81401238)。

  • 相互競爭的利益沒有宣布。

  • 倫理批準這項研究是四川大學的倫理委員會批準。

  • 出處和同行評議不是委托;外部同行評議。

  • 數據共享聲明沒有額外的數據是可用的。