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客觀的7重組病毒衣殼antigen-IgA (VCA-IgA) ELISA試劑盒在中國被廣泛使用,但其診斷效果沒有評估。在這項研究中,我們評估是否這些工具的診斷效果類似於標準工具包(EUROIMMUN,呂貝克,德國)。
方法診斷病例對照試驗對200例鼻咽癌(NPC)和200控製從NPC-endemic地區在中國南部。曲線下的麵積(auc)的敏感性和特異性檢測包比較與標準裝備。每個包的兩次試驗法的可靠性是由組內相關係數(ICC)。他們的診斷準確性結合巴爾病毒核抗原1-IgA (EBNA1-IgA)也在物流評價模型。
結果三個測試kits-BB, HA和KSB-showed診斷準確性平等的標準裝備,具有良好性能的auc(0.926 - -0.945),未發現顯著差異的敏感性在早期和晚期npc。可以超過0.8。建設了三個邏輯回歸模型,這些模型(0.961 - -0.977)的auc是比個人VCA-IgA板。所有新車型診斷準確性平等的標準裝備。新截止值這三個工具和相應的組合為研究人員複製和使用在NPC早期檢測和篩選提供了在未來。
結論三個重組VCA-IgA kits-BB, HA和KSB-had診斷影響平等的標準裝備,,結合EBNA1-IgA logistic回歸模型,可用於未來的篩查人大。
- 鼻咽癌
- 巴爾病毒
- VCA-IgA
- 診斷效果
- 篩選
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本研究的優點和局限性
這是第一個研究進行綜合評價重組商業診斷病毒衣殼antigen-IgA (VCA-IgA)在中國(ELISA)試劑盒,和物流模型結合VCA-IgA巴爾病毒核抗原1-IgA建立了。
VCA-IgA包新截止值及其對應的組合為研究人員複製和使用在鼻咽癌(NPC)早期發現和篩選提供了在未來。
所有病例和控製來自中國南部NPC-endemic地區,因此,這些結果可能並不適用於其他人群。
隻有33早期NPC病例收集。控製是從農村招募,但是從市區人大病例的一半。
人大的截止值篩選通過這些模型中描述這項研究必須驗證潛在的大規模篩選。
介紹
鼻咽癌(NPC)是一種常見的鱗狀細胞癌在中國南部和東南亞。人大在中國南部的年度發病率可達25每100人000人每年,約25倍高於世界其他地區。1 - 4人大是一種複雜的疾病造成的eb病毒(EBV)、慢性感染、環境和宿主基因在癌形成一個多步過程,但直到現在沒有有效的預防措施。5 - 9患者長期生存率之間差異顯著(第三和第四階段)和晚期早期NPC(階段I和II)。四年年代urvival的早期NPC患者為96.7%,而相比之下,對於那些在晚期人大67.1%。5質量檢測已經成為最實用的方法來改善早期檢測,患者總體預後,人大在流行地區。10 11
血清抗體EBV-related抗原,特別是IgA對病毒衣殼antigen-IgA (VCA-IgA),早期antigen-IgA, EBV核抗原1 (EBNA1-IgA)等等,居高不下的平均38個月在臨床前階段,9-14和血清學測試這些標記是簡單和便宜。15—因此,自1970年代以來,這些測試已經被使用作為人大在流行地區的篩選標記。在我們之前的研究中,我們評估了七個商業EBV-related抗體的ELISA診斷性能,發現EBNA1-IgA(中山生物技術,中國)和VCA-IgA (EUROIMMUN,呂貝克,德國)前兩seromarkers ELISA,以下地區curve (加州大學)of 0.95 (95% ci 0.93 - 0.97)和0.94 (95% ci 0.92 - 0.97),分別。16我們進一步證實VCA-IgA和EBNA1-IgA優於任何個人EBV seromarkers,AUC0.97 (95% CI 0.96 - 0.99)。15 - 17日因此,自2011年以來,VCA-IgA和EBNA1-IgA被推薦為中國人大篩選的標準工具。18
如今,幾種商業VCA-IgA工具包基於重組肽在中國已經發展,目前廣泛用於早期發現和篩查人大。然而,他們獨自人大診斷性能,結合EBNA1-IgA尚未評估。在這項研究中,我們評估的影響是否NPC-diagnostic包相媲美的標準VCA-IgA工具包,可以代替它。如果是這樣,我們將進一步探索相結合的早期檢測和診斷策略和EBNA1-IgA大規模篩查人大。
方法
研究人群
血清標本不斷收集從200年人大住院患者在中山大學癌症中心(SYSUCC)從2013年1月至2013年6月。這些病例是由活檢組織學證實,臨床階段分類根據2009年國際癌症控製聯盟標準,其中包括33 early-stag患者e人大(階段I和II)和167年在晚期人大(階段III和IV),入選標準包括30至59歲,居住在六high-endemic的省份之一的中國南方(廣東、廣西、江西、湖南、福建、海南Province)。O其他信息,包括人口數據、吸煙、喝酒的曆史和人大的家族史,被醫生負責收集。所有治療前血清樣本收集。
200年健康對照組中隨機選擇健康的人參加體檢四會癌症中心(廣東省四會城市,中國)從2013年7月到2013年9月,頻率與病例按年齡5年年齡和性別。所有參與者完成一個簡短的問卷,記錄人口數據,吸煙、飲酒史和家族史的人大和捐贈3毫升的血液。
本研究的臨床研究倫理委員會批準SYSUCC (yb2015 - 029 - 01),和所有參與者提供書麵知情同意。
血清學檢測EBV抗體
血清和巴菲外套分離收集和存儲在< 4小時後−正在測試前80°C。所有的標本溶血的或反複凍結的兩倍多。7重組VCA-IgA包、標準VCA-IgA工具包(EUROIMMUN)和標準EBNA1-IgA工具包(中山)進行測試(表1)。
所有樣品都重新編號和測試盲目地由一個技術員根據製造商的指示。光度測量的抗體水平進行評估,提供光密度值(OD)。參考ODs(棒)獲得根據製造商的指示OD值除以參考控製。調查每個套件的兩次試驗法的可靠性,10%血清樣本(40)樣本是隨機選擇和重新測試。
統計分析
人口特征和人大之間的危險因素病例和控製被χ相比2測試。每個單一的截止值工具定義最大的Youden指標(靈敏度+特異性−1)選擇從每個接受者操作特征(中華民國)。每個設備的診斷效能評估了AUC,和non-inferiority測試基於引導的方法進行,以確定這些重組的AUC檢測包被劣質的標準工具包(讓Δ= 0.05是預先確定的臨床意義的對等限製)。19日至22日每個工具計算的敏感性和特異性及其95% CIs Simel的估計的方法等23(敏感性95% CIs的早期組被查找表方法估計二項分布,因為樣本大小是小於50)。24敏感性的差異在早期和晚期人大與每個設備被χ相比2測試(確切概率法和McNemar檢驗法測試χ時將被指定2測試意味著皮爾森的χ2測試)。組內相關係數(可以)進行了兩次試驗法的可靠性。
防止偏見和研究病毒因素,我們匹配基線協變量(性別和年齡)和一些重要的人大危險因素(吸煙、喝酒和人大的曆史)。二進製無條件使用邏輯回歸建立VCA-IgA和EBNA1-IgA的公式。每個公式的診斷效能評價的敏感性,特異性和AUC,與標準公式相比,分對數p =−3.934 + 2.203 VCA-IgA EBNA1-IgA (EUROIMMUN) + 4.797。截止p值在相應的邏輯回歸區分人大病例定義和控製從每個中華民國Youden指數最大的選擇。兩個最小可接受的假陽性(1-specificity), 3%和7%,使用經驗建立截止p值分類不同的人大風險子組。16日17
non-inferiority測試是單側,p > 0.05被認為是非劣。其他測試是雙麵,p < 0.05被認為是具有統計學意義。數據分析通過SAS V.9.2和SPSS V.16.0軟件。
結果
基準信息
基準信息在性別、年齡、吸煙、飲酒和人大家族史之間類似的病例和控製,以及它們之間被發現沒有明顯的統計學差異。此外,沒有統計上顯著的差異之間的這些項目早期和晚期病例(表2)。
8個品牌的診斷精度VCA-IgA工具包和EBNA1-IgA工具包
表3表明四個kits-KSB的AUC, BB, BNV HA-were高達的標準VCA-IgA工具包(AUC 0.942;95%可信區間0.920到0.964)。0.945 auc,, KSB (95% CI 0.925 - 0.966), 0.940 BB (95% CI 0.916 - 0.964), 0.936 BNV (95% CI 0.911 - 0.961)和0.926公頃(95% CI 0.900 - 0.953)。此外,GBI的auc,香港和z是低於標準的設備。此外,沒有發現顯著差異在早期和晚期人大的敏感性六包(p > 0.05),除了BNV (p = 0.044)。
這兩次試驗法的可靠性的8個品牌VCA-IgA工具包和EBNA1-IgA工具包
百分之十血清樣本(40)樣本是隨機選擇和重新測試的計算每個品牌的裝備的國際刑事法庭,VCA-IgA或EBNA1-IgA。包都是優秀的兩次試驗法的可靠性(> 0.75,優秀)根據弗萊斯的分類25(表4)。
的診斷精度VCA-IgA和EBNA1-IgA物流模型的組合
我們選擇了三個風投A-IgA包高auc,沒有差異診斷為早期和晚期人大和優秀的兩次試驗法的可靠性,然後每個EBNA1-IgA工具包的物流模式相結合。三個邏輯回歸模型建立:
LogitP=−3.2323 + 0.8060 VCA-IgA EBNA1-IgA (BB) + 1.1044
LogitP=−2.7591 + 0.6380 VCA-IgA ebna1-iga (HA) + 1.0620
LogitP=−2.6039 + 0.5312 VCA-IgA EBNA1-IgA (KSB) + 1.1673
在這些模型中,VCA-IgA和EBNA1-IgA都統計上顯著的人大風險的獨立預測因子(p < 0.05),每個組合的AUC顯著大於每個VCA-IgA (p < 0.05)。的AUC KSB增加從0.945 (95% CI 0.925 - 0.966), 0.964 (95% CI 0.947 - 0.981);BB增加從0.940 (95% CI 0.916 - 0.964), 0.977 (95% CI 0.963 - 0.991)和公頃增加到0.926 (95% CI 0.900 - 0.953), 0.961 (95% CI 0.943 - 0.979) (圖1)。
中華民國BB,哈,KSB,EUROIMMUN和他們的結合EBNA1-IgA。
表5顯示了診斷精度的三個新組合和標準組合(分對數p =−3.934 + 2.203 VCA-IgA (EUROIMMUN) + 4.797 ebna1-iga)區分人大病例和控製。這三個組合的AUC是高達的標準組合(AUC 0.970;95%可信區間0.956到0.985)(p < 0.05)。此外,沒有發現統計上的顯著差異的敏感性每個結合早期和晚期人大(p > 0.05)。
我們使用兩個最小可接受的假陽性3%和7%的利率(1-specificity)定義高危地域截止值的新組合。相應的邏輯回歸為BB p值分別為0.707和0.232,0.766和0.364公頃和0.831和0.384 KSB,和相應的真陽性利率為BB(敏感)分別為88.0%和93.5%,78.0%和88.0%為KSB公頃,79.0%和87.5%。
討論
在我們的研究中,七個重組VCA-IgA工具進行評估,這些,KSB, BB和HA診斷效果一樣好這些標準工具包的敏感性,特異性和AUC。VCA-IgA結合EBNA1-IgA通過邏輯回歸模型增加了診斷的準確性這三個包,和所有組合以及執行標準結合敏感性,特異性和AUC。這是第一個研究進行綜合評價重組商業診斷VCA-IgA (ELISA)試劑盒在中國,和物流模型VCA-IgA結合EBNA1-IgA建立了。此外,新的截止值這些VCA-IgA工具和相應的組合為研究人員複製和使用在NPC早期檢測和篩選提供了在未來。
在這項研究中,我們首先計算每個品牌的診斷性能VCA-IgA工具包。標準的AUC VCA-IgA工具包(EUROIMMUN)為0.942 (95% CI 0.920 - 0.964),這是一致的withr西文從我們先前的研究和驗證,結果診斷VCA-IgA很好和穩定的性能。16日17我們還發現,敏感性、特異性和auc三kits-KSB, BB和HA-were高達的標準裝備,和敏感性無顯著差異被發現在早期和晚期人大。此外,所有兩次試驗法的再現性是優秀的(> 0.75)係數差值的變化測試和測試結果的分析所示補充表1。這些結果表明這三個包有平等的診斷效果,可以代替標準裝備。這些重組商業診斷包的成本隻有一半的標準裝備,使他們更有效的成本。
巴爾病毒衣殼抗原(VCA)是一個晚期蛋白在EBV裂解性感染。VCA包含一批衣殼蛋白,如VCA-p18 (BFRF3) VCA-p23 (BLRF2) gp125/110 (BALF4)等等,具有獨特的免疫優勢種和特異抗原域。這些域包含幾個小肽區域(抗原表位),可以組合為VCA-IgA形成一個強大的診斷試劑。26日27日EUROIMMUN工具包的衣殼蛋白28熱解產物的提取人類B淋巴細胞(P3HR1細胞株)感染EBV和包含本地EBV的衣殼蛋白。我們注意到,與標準的工具結合本地衣殼蛋白,這些測試套件包含主要p18重組衣殼蛋白(VCA-p18)。VCA-p18是一個小的衣殼蛋白包含幾個小肽區域(抗原表位),可以組合成一個強大的診斷試劑VCA-IgA抗體反應。27一些研究人員報道,VCA-p18 IgA的主要VCA抗原的反應。27 29我們的研究表明,這些VCA-p18重組的auc包超過0.85,和三個人有同樣的診斷效果的標準k我t,這表明,altho啊的製造過程重組VCA-p18包仍然需要改進,一些重組工具可以代替人大診斷的標準裝備。
血清抗體水平(杆)提供連續數據,區分人大的截止值情況下和控製是至關重要的早期檢測和篩查人大。一個合理的截止值可以平衡敏感性和特異性。在早期發現和篩查人大,靈敏度高的識別需要高危個體,需要和高特異性降低誤診率和相關成本。根據提供的截止值包的指令,測試套件的敏感性總是太低,而他們的年代pecificities總是太高。例如,KSB的敏感性和特異性是0.780和0.925,分別,這意味著舊的截止值應該(在線調整補充表2)。我們建立了n電子戰截止值區分人大病例和控製由Youden指數年代,然後獲得合理的敏感性和特異性。調整後,新KSB截止值為0.283,0.890和0.875,敏感性和特異性,分別。此外,沒有發現敏感性和特異性之間的差異這三個包-KSB, BB和ha和這些的標準裝備。由於低percentage (< 20%)的早期階段在診所,我們隻能收集33早期NPC參與者在我們的研究中。池的敏感性分析早期和晚期階段隻在一起是不合適的。我們做亞組分析,發現也沒有統計上顯著的敏感性的差異這三個包對早期和晚期人大。此外,沒有早期敏感性之間的差異這三個標準的工具和設備太BB(0.202, 0.0672公頃和0.112 KSB)。
至於VCA的標準,我們發現VCA-IgA和EBNA1-IgA物流模型的組合增加了診斷精度小於0.946的人大auc超過0.961。敏感性和特異性也增加。例如,BB的敏感性和特異性,從0.865和0.920增加到0.935和0.955,分別。VCA-IgA和EBNA1-IgA EBV對應的抗體裂解周期蛋白和分別延遲基因產物。因此,它是合理的,主機的抗體反應裂解周期一個d latency-associated EBV-related蛋白質可以彼此互補在人大的診斷,以及兩者的結合可以增加人大的診斷準確性。11 30此外,這三個新組合診斷影響敏感性(包括亞組分析),特異性和auc等於這些標準的組合,這表明組合的三個重組工具可以用於早期發現和診斷篩查人大。在這項研究中,控製個人來自NPC-endemic領域,屬於一個篩選目標人群,因此我們試圖定義人們在不同風險水平這些人大篩選的新組合。與其他常見疾病相比,全國人大篩選目標人群的發病率相對較低(每100人000人每年)。2 10 31因此,重要的是,假陽性率是足夠小,以避免不必要的軟式內鏡活檢和人大篩選參與者心理壓力。相反,真陽性率(等於靈敏度)應該可以接受的。32我們使用兩個最小可接受的假陽性的幾率3%和7%的高風險地域截止值,分別17和相應的真陽性比率(敏感)這三個包了78.0% -93.5%,-88.0%和87.5%5分別。如果基線血清學的結果實現的定義風險高,診斷檢查和不同的參與者被稱為篩查間隔被分配到高風險、中等風險和低風險組。這些團體的篩查間隔是1,分別為1和4年。17
這項研究有一些局限性。首先,本研究是一個隻有學習和所有情況和控製來自中國南部NPC-endemic地區(從醫院控製);因此,這些結果可能並不適用於其他人群。其次,由於比例較低(< 20%)的早期階段在診所,我們隻能收集33早期NPC參與我們的研究。但這種現象也表明,大多數病人通常人大才發現是在一個先進的階段。發現出在現實生活中這樣的人也很有意義。第三,控製是從農村招募,但是從市區人大病例的一半(農村:城市= 95:105)。艾爾盡管沒有證據表明有不同的農村和城市人民之間的感染率,它可能導致其他一些未知的偏見。第四,這是一個診斷試驗病例對照設計和新截止值這些新方案人大篩選從這項研究必須驗證潛在的大規模篩查。
結論
三重組VCA-IgA kits-BB, HA和KSB-had診斷效果相等的標準裝備。他們可以代替標準工具包和組合可用於早期發現和篩查人大。
引用
腳注
貢獻者S-MC和QL獲得資金;RG, LW L-FZ導致研究概念和設計;RG進行實驗;LW, Y-FY J-LD、S-HX S-HC,詹,M-JY和氯或清除數據;RG分析和解釋數據;RG, S-MC和QL起草或修訂後的手稿。所有作者至關重要的知識內容的修訂後的手稿。所有作者閱讀和批準了最終版本的手稿。
相互競爭的利益沒有宣布。
病人的同意細節已被刪除從這種情況下描述/這些案例描述,以確保匿名性。編輯和審稿人的詳細信息和滿意的信息備份的情況下,作者。
倫理批準中山大學癌症中心IRB。
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