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摘要
目標本研究旨在確定英國成人口腔高危人乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染的患病率和相關危險因素，並探討口腔黏膜頰上皮細胞和全血葉酸濃度之間的關係。
設計這是一項觀察性研究，旨在確定研究人群中口腔HR-HPV的患病率。進行了一項病例對照研究，以探討感染與葉酸狀態之間的關係。
設置這項研究於2013年4月至2014年8月在英國謝菲爾德進行。
參與者700名參與者，年齡在18-60歲之間，從大學生(n=179)、大學和醫院工作人員(n=163)、牙科醫院病人(n=13)、謝菲爾德性健康病人(n=122)和公眾(n=223)中招募。
幹預措施參與者完成了一份生活方式和性行為問卷，提供了用於檢測口腔HR-HPV的口腔衝洗和含漱樣本，以及用於測量口腔黏膜頰上皮細胞葉酸的口腔粘膜頰上皮細胞樣本。采集血樣測定全血葉酸濃度。
結果測量研究人群中口腔HR-HPV感染的流行率是主要的結局指標。次要結果測量包括危險因素、葉酸狀態和感染之間的關係。
結果該隊列中口腔HR-HPV感染率為2.2% (15/680)，HPV16或HPV18陽性0.7%(5/680)。20份樣本因HPV檢測材料不足而被排除。口腔感染HR-HPV的參與者更有可能是前吸煙者，並且有更多的性伴侶和口交性伴侶。葉酸水平與HPV感染的可能性無關。
結論在英格蘭北部謝菲爾德的成年男性和女性中，口腔感染HR-HPV的患病率很低。吸煙和性行為與HR-HPV陽性相關。
試驗注冊號ID14106。
- 人乳頭狀瘤病毒
- 頭頸癌
- 腫瘤學
- 葉酸
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數據來自Altmetric.com
本研究的優勢和局限性
這是關於英國男性和女性口腔高危人乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染流行率的第一份報告。
感染的低流行率可能隻賦予有限的能力來確定口腔HR-HPV感染的危險因素和與葉酸狀態的關聯。
自我報告的性行為、吸煙和飲酒行為是使用未經驗證的問卷收集的，因此可能不準確。
介紹
由於高危人乳頭瘤病毒(HR-HPV)口腔感染的發病率增加，口咽癌(OPC)在世界範圍內的發病率正在上升。1與HPV感染相關的OPC病例比例存在很大的地域差異;最近的一項研究發現，59.3%的北美、31.1%的歐洲和4.1%的南美OPC樣本對HPV16呈陽性。2鑒於HPV陽性OPC的增加，目前有興趣獲得口腔HPV感染流行率和監測趨勢的可靠數據，以便更好地了解感染和癌症進展的病因學。考慮到目前關於男性接種HPV疫苗的爭論，進一步了解口腔HPV感染的流行情況尤為及時。3.
最近對全球29項研究進行的薈萃分析發現，口腔HR-HPV感染的總體患病率為2.7%。4大多數報告口腔HR-HPV患病率的研究都是在北美或南美進行的，並且缺乏關於英國口腔HR-HPV患病率的公開數據。蘇格蘭HOPSCOTCH試驗收集了380名參與者的口腔衝洗液和含漱液樣本，報告了通過牙科診所招募的16-69歲男性和女性口腔HR-HPV感染率為3.7%。5此前在英國倫敦進行的唯一一項研究報告稱，艾滋病毒陰性的男男性行為者(MSM)的HR-HPV患病率為5.9%。6英國人口口腔HR-HPV患病率信息的缺乏構成了一個重要的知識缺口。
性行為和吸煙狀況被認為是口腔HR-HPV感染最重要的預測因素。4 7 8此外，有證據表明，維生素葉酸可能通過與HPV感染和持續相關的機製影響HPV相關癌症的風險。9我們小組和其他人的研究表明，紅細胞葉酸水平低與宮頸HPV感染風險增加有關，10 11人乳頭狀瘤病毒的持久性9宮頸上皮內瘤變或浸潤性宮頸癌。11口腔HR-HPV感染與葉酸水平之間的關係以前沒有研究過。在這裏，我們調查了英國謝菲爾德參與者口腔HR-HPV感染的患病率，並探討了相關的危險因素和葉酸狀況。
方法
研究設計
采用病例對照研究設計，比較HR-HPV陽性參與者與三個HR-HPV陰性對照樣本的葉酸狀況;性別、年齡和吸煙狀況匹配。病例對照研究的樣本量基於我們對持續感染HR-HPV的婦女(病例)和病毒被清除超過6個月的婦女(對照組)宮頸細胞葉酸濃度的巢式病例對照研究的數據。12我們檢測到病例與對照組宮頸細胞中平均葉酸濃度幾乎相差兩倍(平均±SD，病例中5.4±4.83 ng葉酸/mg蛋白質，對照組為2.8±2.70)。我們計算出50例病例和150例對照可以讓我們檢測到口腔黏膜頰上皮細胞葉酸在病例(口腔HR-HPV陽性)和對照組(口腔HR-HPV陰性)之間有45%的差異，冪為80%，p<0.05。
據報道，口腔HPV的患病率變化很大，在研究期間，英國的數據很少。塔拉等13報告在英國的口腔上皮細胞樣本中有44%的HR-HPV患病率。Gillison等8報告口腔HPV感染的年齡依賴患病率在4.2%至11.4%之間，HR-HPV平均為3.7%。樣本容量為700人，假設樣本人口中患病率為7%。
招聘
2013年4月至2014年8月，在英國謝菲爾德招募了700名年齡在18歲至60歲之間的男性和女性。謝菲爾德是一個擁有57萬人口的城市，其中大約5萬是兩所大學的學生。謝菲爾德全職員工的工資低於全國平均水平;然而，在英格蘭北部的許多城市都可以看到這種情況。雖然本研究沒有收集社會經濟數據，但預計研究結果適用於其他英格蘭北部城市。
參與者從謝菲爾德各地招募，包括:大學生(179)，大學和醫院工作人員(163)，牙科醫院病人(13)，性健康謝菲爾德病人(122)和公眾(223)。招募是通過大學和醫院的電子郵件分發名單、海報、病人來信、報紙廣告和醫院現場招聘來實現的，以獲得多樣化的研究人群。
排除標準包括既往HPV疫苗接種，口腔病變(在口腔粘膜頰上皮細胞收集過程中引起疼痛或不適的任何病變)，既往口腔癌診斷和/或無法理解或遵守研究程序。
抽樣和問卷調查
參與者被要求完成一份與吸煙狀況、飲酒和性史有關的調查問卷，該問卷改編自之前的試驗。14完整的調查問卷可以在網上找到補充圖1．示例問題包括:
“你一生中有過多少不同的性伴侶?”和“你曾經給伴侶口交過嗎?””
每位參與者都提供了一份手指刺血樣本，用於全血葉酸分析。
口腔黏膜頰上皮細胞樣本采用Orcellex軟刷(Rovers Medical Devices, the Netherlands)在口腔粘膜頰表麵旋轉10圈，刷刷口腔頰粘膜(口腔內的頰粘膜)收集細胞。將細胞移入磷酸鹽緩衝鹽水中，250 × g離心10分鍾。稱量細胞微球，用500µL 1.0%抗壞血酸重懸，室溫孵育90分鍾。孵育後的樣品在液氮中快速冷凍，以幫助細胞裂解，並在- 80°C保存。收集的冷凍口腔粘膜粘膜上皮細胞和血液樣本被運送到英國阿伯丁的Rowett營養與健康研究所，使用simultrack - s放射測定試劑盒(MP Diagnostics，由英國貝德福德的Anachem公司提供)測量葉酸。
采集口咽部和口腔脫落細胞，用生理鹽水漱口30 s檢測HPV。HPV檢測在謝菲爾德教學醫院國家衛生服務(NHS)基金會信托的皇家哈勒姆郡醫院細胞學部進行，在羅氏平台上使用線性陣列HPV基因分型測定，β-球蛋白的存在被用作樣本有效性的生物標誌物。檢測樣本中是否存在HR-HPV亞型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66，根據國際癌症研究機構的定義，這些亞型與2a類致癌物68一起被定義為1類人類致癌物。15
統計分析
所有統計分析均使用SPSS V.21進行。使用來自整個數據集的數據進行Logistic回歸分析，以確定年齡、性別、吸煙、飲酒和性行為對HR-HPV陽性風險的影響。此外，每個HR-HPV檢測陽性的人與三個HR-HPV檢測陰性的人相匹配，年齡、性別和吸煙狀況相匹配。使用來自整個數據集的數據以及來自匹配樣本的數據，采用Logistic回歸分析來確定全血葉酸和頰細胞葉酸對HR-HPV陽性可能性的影響。
病人及公眾參與
沒有參與者參與研究設計。
結果
被招募到研究中的參與者的特征顯示在表1，根據所有參與者的HR-HPV狀態。
15人(2.2%)口腔HR-HPV感染檢測呈陽性。其中4人HPV16陽性，1人HPV18陽性，其餘10人HR-HPV 31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型、66型和68型陽性(具體類型無法用這種檢測方法區分)。
與從不吸煙的人相比，前吸煙者明顯更可能是HR-HPV陽性(OR 3.12, 95% CI 1.07至9.15)，而目前吸煙者的樣本量不足以判斷這一人群的風險。性伴侶較多(超過6人)的參與者與性伴侶少於6人的參與者(6-10名性伴侶OR 5.93, 95% CI 1.18至29.26,11名性伴侶OR 7.70, 95% CI 1.58至37.51)相比，HR-HPV陽性的可能性明顯更高。與口交伴侶較少的參與者相比，有6-10個口交伴侶的參與者患HR-HPV的風險也更高(OR 7.29, 95% CI 2.34 - 22.74)。報告超過11名口交性伴侶的參與者的HR-HPV患病率增加(OR 2.46, 95% CI 0.47至12.92)，然而，這沒有達到統計學意義。
HR-HPV陽性受試者的全血葉酸為(mean±SD)， HR-HPV陰性受試者的全血葉酸為175.4±47.8 ng/mL, HR-HPV陰性受試者的全血葉酸為164.3±64.3 ng/mL，匹配的HR-HPV陰性對照組的全血葉酸為156.4±43.7 ng/mL (圖1)。
測量口腔HR-HPV感染陽性(病例)、口腔HR-HPV感染陰性和口腔HR-HPV感染陰性(對照組)與HR-HPV陽性(性別、年齡和吸煙狀況)參與者樣本中的全血葉酸(左)和口腔黏膜頰上皮細胞葉酸(右)。未觀察到顯著差異。平均數±標準差。HR-HPV，高危人類乳頭瘤病毒。
HR-HPV陽性受試者的口腔黏膜頰上皮細胞葉酸濃度為0.0524±0.0566 ng/mg細胞顆粒，HR-HPV陰性受試者的葉酸濃度為0.0514±0.0631 ng/mg細胞顆粒，匹配的HR-HPV陰性對照(按性別、年齡和吸煙狀況與HR-HPV陽性對照)的葉酸濃度為0.0544±0.0644 ng/mg細胞顆粒(圖1))。全血葉酸和口腔黏膜頰上皮細胞葉酸與口腔HR-HPV感染風險均無顯著相關性。
討論
本研究中觀察到的口腔HR-HPV感染患病率(2.2%)與Shigeishi和Sugiyama進行的全球綜述和薈萃分析一致，該研究報告了2.7%的口腔HR-HPV感染。4然而，本研究的患病率低於之前在英國進行的兩項研究，在蘇格蘭380名參加牙科診所的參與者中，患病率為3.7%5倫敦男男性接觸者的患病率為5.9%。6考慮到研究人群的差異，這種患病率的差異並不令人驚訝。與蘇格蘭的參與者相比，我們的隊列中25歲以下的參與者比例更高，以前的研究表明，年齡增長與口腔HR-HPV患病率之間存在弱關聯。8倫敦研究人群由男男性行為者組成，報告的患病率(5.9%)與先前報告的男男性行為者口腔HR-HPV感染(6.0%)相當。4這些流行數據可以被認為與英國人群相關，然而，鑒於全球報告的口腔HPV患病率的多樣性，這不能推廣到世界其他地區。
本研究以及許多測量全球HPV患病率的研究的一個局限性是所使用的HPV檢測方法的多樣性以及檢測中包括的HR-HPV亞型。本研究選擇的檢測方法是羅氏線性陣列HPV基因型檢測，可檢測所有13種1類致癌物HPV亞型。在最近的薈萃分析(8/29項研究)中，羅氏線性陣列係統是最常用的檢測方法，即使在每項研究中檢測到的HPV亞型差異很大。4鑒於HPV16和HPV18在HPV感染的OPC(和宮頸瘤變)病例中占主導地位，許多研究將其分析局限於HPV16和HPV18感染，然而，本文提供的數據顯示，HPV16和HPV18僅限於5名參與者，而其他HR-HPV亞型在10名參與者中被檢測到。
目前通過英國國民健康服務體係(NHS)對女孩接種的HPV疫苗可預防四種HPV毒株(16、18、6和11)。本文提供的數據強調了未來研究的必要性，以調查其他HR-HPV毒株導致OPC發展的相對患病率和風險，以及這可能對未來發展和實施男性疫苗接種的影響。
先前的研究表明，口交經驗、口交伴侶數量與口腔HR-HPV感染之間存在很強的關聯。4個16這項研究的結果證實了這一關聯，因為它表明，與口交性伴侶少於6名的人相比，有6-10名口交性伴侶的人感染口腔HR-HPV的風險顯著增加;那些報告有超過11個口交伴侶的人的風險沒有顯著增加;可能是因為樣本量較小。這項研究還表明，口腔感染HR-HPV的人的性伴侶總數更多，這再次與之前的研究一致。4個16
據報道，吸煙與HR-HPV感染風險增加有關，在女性中有很強的相關性。4此外，吸煙可能增加口腔HR-HPV持續感染的可能性。17Fakhry等先前顯示煙草暴露與口腔感染HPV16之間存在很強的劑量反應關係，18然而，在我們的研究中，目前吸煙者感染HR-HPV的風險並沒有明顯增加。這可能在一定程度上反映了英國人群中吸煙的患病率較低(隻有16%的人表示自己目前吸煙)，而Fakhry研究中描述的美國人群中(80%的人報告在過去5天內吸煙)。18然而，這項研究確實表明，與從不吸煙的人相比，曾經吸煙的人更容易患口腔HR-HPV感染。
在我們的研究中，飲酒與口腔HR-HPV感染的發生率無關，這與其他研究結果一致。4酒精與人乳頭瘤病毒感染之間的關係似乎很複雜，一項研究顯示，大量飲酒與口服人乳頭瘤病毒感染之間存在微弱關聯(在考慮性行為之前)。8另一項研究表明，曾經喝酒的人感染口腔HPV的風險低於從不喝酒的人。19
葉酸水平低與不同部位的癌症有關，包括口腔癌和咽癌，20.流行病學數據有合理的機製支持。重要的是，還有一些數據表明，葉酸水平低可能會增加獲得和保持HPV感染的可能性。9此外，研究表明，低葉酸水平增加了HPV整合到角質形成細胞宿主基因組，並減少了體外人角質形成細胞中病毒衣殼的產生。21在本研究中，我們發現全血葉酸濃度、口腔黏膜頰上皮細胞葉酸濃度與口腔HR-HPV感染之間沒有相關性。這可能表明葉酸狀態和口腔HR-HPV感染之間沒有因果關係，但在我們的樣本中，少量口腔HR-HPV感染檢測呈陽性的參與者將降低檢測到這種關聯的可能性。
該研究存在局限性，尤其是在患病率較低且ci廣泛的情況下，很難得出有關口腔HR-HPV感染危險因素的結論。除此之外，調查問卷沒有得到驗證，依賴於自我報告的性行為、吸煙和飲酒行為，這可能不準確。
據我們所知，這是第一個調查英國成年男性和女性口腔HR-HPV感染流行率的研究。患病率很低，數據表明，HR型口腔感染與煙草使用和性行為有關。
致謝
作者感謝皇家哈勒姆郡醫院細胞學部門的John Crossley對HPV檢測的貢獻，以及皇家哈勒姆郡醫院謝菲爾德性健康部門的Sylvia Bates對招募人員的幫助。作者感謝謝菲爾德大學企業信息與計算服務的Jean Russell提供的統計分析和建議。
參考文獻
腳注
貢獻者本研究由HJP和CM構思設計，VH參與。VH負責項目的日常運作;招募和收集知情同意書由VH和KD負責;KD和VH管理所有診所，收集和處理口腔樣本。SD和NJH開發、優化並運行了口腔、口腔和紅細胞樣本的葉酸測定。所有作者都參與了稿件的準備工作，並批準了最終版本。
資金本研究由世界癌症研究基金會(WCRF UK)支持，作為世界癌症研究基金會國際資助項目的一部分(資助號2012/587)。
相互競爭的利益沒有宣布。
病人的同意不是必需的。
倫理批準該研究得到了NHS亨伯橋研究倫理委員會(REC參考文獻13/YH/0060)的批準。
出處和同行評審不是委托;外部同行評審。
數據共享聲明沒有其他數據。