9卷6月6號,2003
研究
人類Metapneumovirus感染住院的孩子1
加斯頓·德·serre†‡,斯蒂芬妮Cote * __, Rodica Gilca†‡, Yacine Abed * __,路易Rochette __‡,米歇爾•g . Bergeron * __和皮埃爾Dery *文摘
我們評估的百分比為兒童急性呼吸道感染住院<3歲歸因於人類metapneumovirus (HMPV)和其他呼吸道病毒在一個前瞻性研究2002年在冬季和春季。我們使用實時聚合酶鏈化驗和其他傳統診斷方法來檢測HMPV人類呼吸道合胞病毒(HRSV),流感病毒在兒童鼻咽吸入等。HMPV在12個(6%)被發現的208名兒童住院急性呼吸道感染、HRSV 118年(57%),和甲型流感在49 (24%)。細支氣管炎診斷2 8例(68%),肺炎(17%)的HMPV-infected孩子;的HRSV感染,99年被診斷為肺炎(84%)和細支氣管炎在30 (25%)。沒有HMPV-infected孩子考入一間特護病房之中,而15%的HRSV或甲型流感感染被承認。HMPV是疾病的一個重要原因在兒童相似,雖然不太嚴重,臨床表現HRSV。
人類metapneumovirus (HMPV)是第一個新成員Metapneumovirus屬(副黏液病毒科家庭),感染人類(1,2)。人類呼吸道合胞體病毒(HRSV)屬於一個單獨的屬同一家庭內(3)。HMPV最近發現在兒童和成人鼻咽吸入急性呼吸道感染(ARTI)在世界的各個部分(1,4- - - - - -7)。受感染的兒童的臨床綜合征範圍從輕微的呼吸問題細支氣管炎和肺炎(1,7- - - - - -9)。
當逆轉錄聚合酶鏈反應(rt - pcr)已經使用的比例HMPV鼻咽吸入樣本中發現兒童不明原因ARTI從1.5%變化到10% (1,4,7)。然而,大多數回顧性研究有局限性:例如,他們小,排除其他病毒陽性的患者,隻有表麵上描述了該病的臨床特征,並且缺乏疾病嚴重程度和死亡數據。此外,在缺乏對照組,這些研究不能區分HMPV是否殖民或致病病毒。最近,斯托克頓等人發現HMPV RNA在405年2.2%的標本influenzalike疾病患者谘詢全科醫生在英格蘭,盡管一些棉簽收集從5歲以下兒童(6)。
本研究的目標是估計的相對貢獻在兒童住院ARTI HMPV並定義其臨床特征和季節性模式相對於其他常見呼吸道病毒在一個冬季。
研究設計
參與者的孩子<3歲住院從12月15日,2001年4月20日,2002年,在魁北克拉瓦爾大學醫院中心,加拿大的魁北克。Case-patients孩子承認一個ARTI(主要是細支氣管炎,肺炎,laryngotracheobronchitis)有鼻咽吸入收集作為疾病的調查的一部分(在這個醫院,收集樣本是標準的做法來評估兒童HRSV)的存在。微生物實驗室研究護士接受合格case-patients確定的鼻咽吸入標本。Case-patients住院兩次被算作兩種情況。研究特定的問卷已經完成由單一研究護士在入學的父母。結束的時候住院,綜述了孩子們的圖表來收集臨床和實驗室數據通過使用一個標準化的協議。符合條件的控製孩子對任何選擇性外科手術住院沒有呼吸道症狀或發燒。在承認,護士獲得簽署同意從父母和收集鼻咽吸入(1 - 2毫升)。這項研究是通過魁北克大學醫療中心的研究倫理委員會。
實驗室檢測
在這項研究中,所有標本case-patients HMPV和控製被rt - pcr檢測,流感A和B, HRSV。抗原檢測為執行HRSV case-patients立即承認。病毒文化和其他抗原檢測化驗進行治療醫生的請求。其餘的標本被凍結在-80°C到隨後的rt - pcr研究。
RNA提取和rt - pcr研究
病毒RNA提取從200μL鼻咽吸入標本使用QIAamp病毒RNA迷你包(試劑盒,Inc .,米西索加、加拿大)。互補的互補脫氧核糖核酸合成通過使用10μL篩選了RNA和Omniscript逆轉錄酶(試劑盒)。六聚體隨機引物(Amersham法瑪西亞生物技術,簡化d 'Urfe,加拿大魁北克)用於RT PCR檢測,步HMPV除外,一個特定的引物(5′-TGGGACAAGTGAAAATGTC-3′)合成HMPV cDNA服役。PCR檢測是為了放大守恒的地區甲型10),B型流感(11)和HRSV (12)基因。新的PCR引物設計的放大HMPV N(蛋白質)的基因。正向和反向引物的序列分別為5′-GAGTCTCAGTACACAATTAA-3′, 5′-GCATTTCCGAGAACAACAC-3′。互補DNA被放大為所有呼吸道病毒通過使用一個標準化的rt - pcr與LC由於“快速上手”項目協議DNA大師SYBR綠色1包(羅氏診斷,拉瓦爾,魁北克,加拿大)在LightCycler儀器(羅氏診斷)。LightCycler融化曲線分析程序是用來識別特定PCR產品。每個PCR檢測可以檢測至少50份病毒的目標。係統發育研究核苷酸序列測定從放大HMPV F基因產物(融合),然後使用neighbor-joining分析算法和Kimura-2參數(9)。
病毒文化和抗原檢測標準
標本被注入到96孔板包含10個細胞係(MDCK、LLC-MK2 Hep-2,人類包皮成纖維細胞、維羅,貂肺、a - 549,橫紋肌肉瘤,293年,和HT-29)然後孵化21天。證實了一個積極的細胞病變效應與單克隆抗體免疫熒光檢測或通過rt - pcr (HMPV) (9)。直接檢測HRSV和流感抗原進行鼻咽吸入樣品通過使用商用immunoenzymatic化驗(RSV TestPack,雅培,雅培公園,IL);正欲Directigen流感A + B,微生物係統,火花,MD)。腺病毒、副流感病毒病毒的病毒抗原1 - 3在標本尋求一個與特定的單克隆抗體免疫熒光法(9)。
HMPV一般人群
進一步評估季節性分布、年齡的影響,HMPV和頻率,我們比較數據從本研究數據報告的使用積極的病毒從大眾文化區域病毒學診斷實驗室,魁北克市的隻有一個執行病毒文化區域(人口600000)。隔離HMPV是通過觀察典型LLC-MK2細胞細胞病理效應,其次是PCR證實感染細胞培養上清液(9)。
統計分析
Wilcoxon的非參數測試是用來比較case-patients的年齡分布和控製和住院治療。與HMPV病例的比例和控製感染和感染HMPV兒童的臨床特征與其他呼吸道病毒感染者χ的比較2測試或Fisher精確檢驗。分析利用SAS軟件8.02版本(SAS研究所,卡裏,NC)。
研究人口和病毒病原微生物
圖1
圖1。入學年齡的孩子住院急性呼吸道感染引起的人類metapneumovirus (HMPV) (A),人類呼吸道合胞體病毒(HRSV) (B),和甲型流感(C)以及……
圖2
圖2。兩周一次的例病毒學與急性呼吸道感染確診病例分布及其控製。
研究人口包括208名住院case-patients ARTI(包括8個孩子們承認兩次)和51個孩子作為控製。case-patients的年齡分布和控製提出了圖1。≤3個月大的嬰兒最有可能住院,而住院率穩步降低了兒童> 3個月。平均年齡略年輕case-patients比控製(平均9個月和12個月,Wilcoxon測試p = 0.06)。在例ARTI中,56%是男性,57%的控製(p = 0.88)。住院的日期是類似case-patients和控製(p = 0.84)圖2)。大多數孩子(90%)沒有基本醫療條件錄取。
鼻咽吸入樣本208 case-patients和51控製。case-patients,出現症狀之間的平均延遲和收集的鼻咽吸入等6天(平均4天)(表1)。這對不同的病毒檢測延遲沒有差別。所有208個樣本case-patients HMPV被PCR檢測,HRSV,流感A和B;204年樣本檢測HRSV抗原;172年被化驗其他病毒抗原;和145年被病毒測試文化對整個小組的呼吸道病毒(如治療醫生下令)。至少一個呼吸道病毒檢測到上述方法之一在164年(78.8%)情況下,而沒有被發現在44 (21.1%)。結合這些診斷技術,12例(5.8%)陽性HMPV, HRSV 118(56.7%),對甲型流感49 (23.6%),B型流感(沒有一個表1)。相比之下,沒有檢測到病毒PCR的控製樣品(p = 0.067, HMPV片麵Fisher精確檢驗)。PCR檢測不了腺病毒、副流感病毒病毒,但是這些病毒中分別為6/145(4.1%)和2/145(1.3%)的測試case-patients使用病毒文化或抗原檢測。單一病毒感染發生在141年(86.0%)164年的積極case-patients和混合感染在23(14.0%)被發現。兩個12 HMPV感染混合(HMPV-influenza和HMPV-HRSV)。另一個組合是HRSV-influenza(18例),HRSV-adenovirus (2)和流感A-adenovirus (1)。
在208 case-patients測試通過為HMPV PCR, HRSV,甲型和乙型流感病毒,積極性率分別為5.8%,51.0%,21.6%,和0%,分別為(表1)。此外,其他16個case-patients識別出的這四種呼吸道病毒有一隻有文化(一個甲型流感和一個HRSV),隻有通過抗原檢測試驗(9 HRSV和三個流感),或者通過文化和抗原檢測測試(兩個HRSV)。在八個孩子中兩次住院,沒有相同的病毒感染在招生。觀察到的特定組合是HMPV-HRSV(兩個),HMPV-no病毒(一)HRSV-no病毒(兩個),HRSV-influenza(兩個),沒有virus-no病毒(一個)。
病例的兩周一次的分布與呼吸道病毒所示圖2。HRSV和甲型流感感染發生主要從一月到三月,而HMPV感染主要發生在3月和4月。例病毒學證實兒童呼吸道感染的比例在2月下降。
病例臨床特征
鑒於HMPV的少數情況下,隻有結果顯示趨勢,因為沒有達到統計比較的意義。HMPV感染住院的高峰年齡是3 - 5個月,而0 - 2個月HRSV感染(圖1)。甲型流感病毒感染發生均勻地在生命的第一年。混合感染的高峰年齡是11個月;這種感染的頻率降低。性別是均勻分布在每一個病毒,但更多的男性(70%)混合病毒感染。與HRSV HMPV大部分(75%,93%,90%,甲型流感病毒感染)的兒童病原體組沒有潛在的醫療條件。與HMPV感染(25%)三個孩子有心髒疾病,包括一個孩子與多個醫療問題。
症狀和體征記錄不同的呼吸道病毒是類似的(表2)。住院時間的中位數HMPV相似,HRSV,和A型流感病毒分別為4.5,5.0和4.0天(p = 0.85)。值得注意的是,四個(33.3%)HMPV-infected孩子>住院7天,其中一個孩子患有其它疾病。與HMPV感染的兒童沒有承認的特護病房(ICU)與15% (p = 0.22)和HRSV 16% (p = 0.34)甲型流感感染。沒有一個孩子在這項研究中死亡。兒童住院治療的持續時間短沒有檢測到病毒比單一或混合感染患兒(Wilcoxon測試,p < 0.001)。三分之二的孩子們給予抗生素在住院期間,盡管幾乎沒有收集的標本細菌培養。
在出院,最後一個毛細支氣管炎的診斷與HMPV給67%的兒童,與HRSV 84%,與甲型流感(p < 0.001)和51% (表3)。中耳炎發生在大約一半的孩子與HMPV HRSV,甲型流感病毒感染。肺炎不經常與HMPV診斷的兒童相比,那些HRSV或甲型流感(17%、25%和37%;p = 0.22)。明確臨床診斷類似的單一和混合感染。
HMPV一般人群
圖3
圖3。兩周一次的分配例病毒學證實人類metapneumovirus (HMPV)情況下的潛在兒科研究(研究小組)和普通人群的回顧性的魁北克市區域病毒學實驗室……
區域病毒學實驗室收到1505呼吸道標本進行病毒文化從1月1日到6月30日,2002年。總共36(包括2研究參與者)或2.9%是陽性HMPV: 24(67%)在兒童< 2歲,5例(14%)在2到4歲,4例(11.1%)在成人30 - 49歲,和3(8%)的>70年的年齡。沒有可以從這些病例臨床資料。大多數隔離(81%)恢複兩個月的時間(從3月23日到5月18日)。HMPV的季節性分布在住院的孩子(研究)和普通人群的季節性分布比較,我們發現,這項研究並沒有覆蓋整個HMPV賽季後,它已經停止HMPV傳播的高峰時間(4月6 20)(圖3)。
我們的前瞻性研究顯示HMPV感染的重要臨床和流行病學特征。首先,我們的數據表明,HMPV是呼吸道病原體流行行為。第二,我們發現HMPV大大有助於ARTI導致兒童住院治療,雖然在較小的比例比HRSV和流感病毒。盡管本研究標本被PCR檢測,隻有一個子集被病毒文化研究。然而,這樣的不完整的病毒測試不應該影響HMPV感染的速度就是明證額外的情況下檢測到文化的缺失。第三,相關的臨床特征HMPV HRSV被發現是類似的。最後,我們的結果表明,HMPV感染兒童的季節性模式可能不同於HRSV和流感病毒雖然還需要更多的研究,因為我們相對比較短的觀察。
最近的研究由我們集團(8,9)和(1,4,6,7)表明,HMPV應該添加到列表中人類的呼吸道病毒性病原體(13- - - - - -18)主要影響兒童,而且其他年齡組。盡管HMPV積極性之間的差異208 case-patients和51控製沒有統計學意義(p = 0.067),沒有其他呼吸道病毒如HRSV和流感病毒在83%的HMPV-infected兒童和症狀的嚴重程度(細支氣管炎、肺炎或兩者)表明HMPV致病性呼吸道病毒。缺乏基本醫療條件在75%的HMPV-infected孩子進一步說明了HMPV的致病性。使用PCR HMPV特別有利,因為這種病毒是挑剔的,很難生長在大多數細胞係(9);此外,快速抗原檢測測試目前還無法獲知。
我們的前瞻性研究首次提供了估計ARTI住院的比例可歸因於HMPV定義良好的兒童人口。2002年12月15日至4月20日,HMPV中檢測出12個(6%)的208名兒童<3歲為呼吸道感染住院。這可能低估了這種病毒的實際影響,因為我們的住院治療研究是年底前停止HMPV社區中傳播。然而,住院的比例在研究期間由於HMPV遠遠小於歸因於HRSV或流感a數據相媲美的小最近的一項研究從芬蘭HMPV中檢測出8%的兒童(年齡4個月到13.5歲)承認為急性氣喘(7)。
我們的研究發現,HMPV疾病不能區別HRSV和甲型流感的臨床結果。然而,HMPV疾病往往是不太嚴重的肺炎病例較少,沒有承認在ICU,更大比例的潛在疾病感染的患者(25%)為< 10% HRSV或流感。然而,HMPV感染相關的大量臨床和經濟影響如圖所示的平均住院時間為4.5天,觀察到三分之一的HMPV-infected case-patients >住院7天。
一小血清學的來自荷蘭的研究表明,所有的孩子5歲> HMPV抗體,這表明高水平的傳播(1)。雖然我們的研究數據僅限於孩子< 3歲,他們建議HMPV引起的疾病是最大的2歲以下兒童,因為他們代表的10(83%)的12 case-patients住院,24(66%)的36 HMPV隔離恢複的診斷病毒學實驗室。這一發現表明,類似於其他地利亞HRSV等疾病的兒童HMPV發生原發感染。HRSV相比,在生命的前2個月達到高峰,HMPV住院兒童似乎峰值略年長的年齡,即。第三個和第五個月之間的生活。然而,鑒於HMPV的少數情況下,這需要觀察證實,在一個更大的研究。同樣的趨勢應該觀察到,這種差異可能取決於一個更長的持久性的抗體或低效率對於HMPV傳輸模式。兩種假設都需要額外的研究。
四周期間從3月中旬到4月中旬,HMPV感染集群(11/12例),並與18.9% ARTI所有住院的孩子在我們的機構。這些發現與HRSV和甲型流感感染,主要發生在1月和2月。被動監測數據的基礎上,從區域病毒學實驗室,HMPV傳播在社區的高峰時間發生在4月6日和20日,2002年,繼續住院兒童的超出了我們的研究的結論,直到5月底。雖然不完整,這些數據表明,季節性暴發HMPV可能不同於其他常見呼吸道病毒。
所述HRSV (12),幾株HMPV流傳一個非常簡短的期間(1月)在我們的研究區域。HMPV菌株分離成兩個F子組,與之前的研究結果相一致(1,5,9),盡管一個應變明顯成為主流,占58.3%的感染。由於小數量的HMPV菌株屬於F群之一,我們沒有試圖關聯HMPV基因型與臨床結果。這種病毒的異質性可能允許多個一生中再感染,特別是老年人和免疫功能低下的患者,我們之前報道(8,9)。
總之,我們的研究支持HMPV感染的疫情性質的概念及其在嚴重ARTI作為重要的病原體的孩子。長達一年的積極監測研究連續多年,在不同的地理區域需要更好的定義HMPV的流行病學。
Boivin博士是一個傳染病專家和病毒學家德魁北克大學醫療中心。他也是拉瓦爾大學微生物學副教授,魁北克,加拿大魁北克。他的主要研究興趣包括呼吸道病毒的快速診斷和皰疹病毒的抗病毒藥物耐藥性的機製。
確認
我們承認拉瓦爾大學的區域病毒學實驗室提供病毒文化的結果。
這項研究是由加拿大衛生研究院的研究(計劃- 52190)和“魁北克昏聵de la矯揉造作的en桑特”(FRSQ)呼吸道健康網絡。家夥Boivin和加斯頓·德·serre高級和初級FRSQ研究科學家,分別。
作者沒有利益衝突。
引用
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分類V。第七次國際病毒分類委員會報告。聖地亞哥:學術出版社;2000年。
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特雷納說道JJ。呼吸道感染。:大富翁DD,惠特利,RJ海登FG,編輯器。臨床病毒學。卷。1。華盛頓:ASM出版社;2002年。p.7-26。
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