14卷2008年1月1日
研究
人類Metapneumovirus感染孩子
,Riikka Osterback __,城鎮Peltola *,圖Jartti *, Raija Vainionpaa __文摘
人類metapneumovirus (hMPV)是一個重要的引起下呼吸道感染住院的孩子,但hMPV的與年齡相關的發病率和效果在未經選擇的社區的孩子沒有被評估。我們研究一群在1 1338 13歲以下兒童呼吸季節在芬蘭期間2000 - 2001。我們檢查了兒童和獲得病毒的鼻拭子檢測在任何呼吸道感染的跡象。hMPV中檢測出47(3.5%)的1338名兒童。hMPV感染的與年齡相關的發病率最高(7.6%)< 2歲,兒童hMPV占1.7%的感染在賽季中。流行高峰期間,hMPV造成隊列中的所有呼吸道感染的7.1%。急性中耳炎在61%的開發hMPV-infected < 3歲的兒童。我們的發現證明hMPV社區的影響是最大的在< 2歲的兒童。
人類metapneumovirus (hMPV)被隔離在2001年由範Hoogen等人在以前virus-negative從呼吸道感染患兒鼻咽吸入物(1)。從那以後,確定了hMPV wordwide (2- - - - - -9)。在溫帶地區,hMPV循環主要在冬季(6,7,10- - - - - -12)。hMPV感染的臨床症狀相似造成的呼吸道合胞體病毒和從輕微上呼吸道感染喘息和嚴重的下呼吸道疾病,需要住院治療(4,5,10- - - - - -14)。雖然hMPV感染被診斷出在所有年齡組,病毒在兒童(可能有最大的影響13,14)。
幾項研究已經表明,hMPV占主要比例下呼吸道感染住院的嬰幼兒(10,13,15,16)。最常見的診斷住院兒童細支氣管炎和肺炎,但偶爾hMPV也可能引起嚴重的疾病需要治療在重症監護病房(17,18)。
hMPV感染住院兒童的臨床特征和hMPV所扮演的角色的一個原因住院已經描述。然而,大多數孩子感染hMPV作為門診病人。盡管hMPV中發現大量的選擇門診兒童(12,19- - - - - -21),據我們所知,沒有以人群為基礎的研究和臨床發病率hMPV對未經選擇的不同年齡的孩子的影響已經進行。我們確定的發生率、臨床特征和總hMPV感染在一個大的影響,兒童呼吸道感染的前瞻性隊列研究在芬蘭。
研究對象和研究協議
這在圖爾庫進行前瞻性研究,芬蘭,2000年10月9日到2001年5月20日。參與孩子們招募了呼吸賽季開始前在日托中心,家庭托兒所,學校在我們的區域(22)。所有的孩子< 13歲都有資格參與;不排除標準。最初的1458名兒童入學,1338年整個隨訪期間的密切監視。參與孩子的基線特征所示表1。
父母被要求把他們的孩子考試的研究診所醫生研究每當發燒或呼吸道感染的跡象出現。每天研究診所開放,所有訪問都是免費的。除了完整的臨床檢查,胸部或竇片得到如果肺炎或鼻竇炎被懷疑的基礎上,臨床症狀。急性中耳炎(急性中耳炎)是由氣動耳鏡檢查、診斷輔助tympanometry的常規使用和spectral-gradient聲反射計。第一次訪問的孩子沒有任何的並發症進行了複查後5 - 7天,或者當父母認為有必要。
症狀日記提供的父母,他們每天記錄孩子的症狀和缺席從日托或學校和父母的缺席工作,因為孩子的病了。隻有實際天失去了記錄。因此,天的疾病發生在自由周末或其他休息日不記錄為導致曠工。
病毒取樣
在每個訪問新呼吸道感染,鼻拭子獲得了從鼻孔2 - 3厘米的深度用無菌棉拭子,然後插入一個瓶含有病毒傳輸介質(23)。標本保存在冰箱和運輸均每日病毒學實驗室部門,圖爾庫大學,在那裏,他們受到病毒文化對流感病毒、副流感病毒病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和腸道病毒PCR檢測。標本被凍結在-70°C到解凍對於本研究。
檢測hMPV
RNA提取從鼻拭子標本用高純病毒核酸工具包(瑞士巴塞爾羅氏公司)根據製造商的協議。hMPV在標本中被確定通過使用一(rt - pcr)。短暫,hMPV互譯rt - pcr擴增。rt - pcr混合物包含rt - pcr緩衝(50更易與L Tris-HCl, pH值8.4,50更易與L氯化鈉,4 L MgCl更易2),0.5 L MgCl更易22更易與L二硫蘇糖醇、0.6 L deoxynucleoside更易與三磷酸腺苷,每個引物1μmol / L, 20 U馬宏升小鼠白血病病毒逆轉錄酶(WI Promega,麥迪遜,美國),4 U RNAsin重組核糖核酸酶抑製劑(Promega),和1 U DyNAzyme (Finnzymes,埃斯波,芬蘭)。反應混合物的總量是50μL和包含5μL提取RNA。hMPV RNA進行rt - pcr的42°C 45分鍾,然後在95°C 7分鍾cDNA放大由40個周期(變性為1分鍾在95°C,退火在58°C 1分鍾,1分鍾和擴展在72°C)和最終在72°C擴展10分鍾。hMPV來自L基因引物(10),底漆是生物素化的。
生物素化的hMPV rt - pcr檢測的產品使用液體雜交試驗。化驗,10μL每個rt - pcr的產品是混合著50μL DELFIA分析緩衝區(PerkinElmer芬蘭Oy,圖爾庫,芬蘭),添加到3平行微量滴定井塗上鏈黴親和素(PerkinElmer芬蘭Oy),和在室溫下孵化30分鍾。井是在室溫下洗Tris-NaCl緩衝區包含漸變20 0.5%,變性5分鍾與150年μL變性緩衝區(25更易與L / L氫氧化鈉和5更易與EDTA),雜化與Eu-labeled hMPV-probe (5′ctg TTA ATA太極拳CAC ACC AG-3′)在40°C 2小時。100μL的雜交進行雜交的解決方案,在2 ng Eu-labeled hMPV每口井的探針與DELFIA稀釋測定緩衝區,其中包括0.85更易與漸變20 L氯化鈉和0.1%。未指明的雜交過程被用熱(50°C) Tris-NaCl緩衝區包含0.5%漸變20。增強熒光,200μL DELFIA增強解決方案(PerkinElmer芬蘭Oy)添加每10分鍾用顫抖的孵化。熒光測量用維克多1420 Multilabel計數器(PerkinElmer芬蘭Oy)。
定義
急性中耳炎診斷了鼓膜的炎症的跡象,中耳積液的存在>1急性感染的跡象。肺炎的診斷是基於放射的確認條件。感染並發症都與hMPV如果他們診斷<14天之後的臨床訪問hMPV-positive標本。
道德
綜述了研究方案和圖爾庫大學醫院的倫理委員會批準。書麵的知情同意是來自所有參與孩子的父母。
hMPV爆發
圖1
圖1。與人類的兒童數量metapneumovirus感染每個星期的研究期間,芬蘭,2000 - 2001。
hMPV感染的第一個案例研究隊列被確認在12月4日的一周,2000年,最後被確認在4月23日的一周,2001 (圖1)。hMPV感染被診斷為每周連續14周從1月8日,2001年,到2001年4月15日。總的來說,hMPV感染被診斷在47個孩子(男孩和21個女孩26日)。孩子們的平均年齡是3.0歲;81%的人< 5歲。
在不同的年齡段hMPV感染的發病率
hMPV感染的發生率最高(7.6%),< 2歲的兒童開始的時候呼吸季節(表2)。30孩子的一個子集< 1歲、3(10.0%)收購hMPV感染在隨訪中。hMPV的發病率隨著年齡的增長逐漸減少。hMPV感染研究的總體發病率的1338名兒童為3.5%(95%可信區間[CI] 2.5% - -4.5%)。
相對hMPV在所有呼吸道感染的效果
hMPV感染的相對比例在所有兒童呼吸道感染是最大的< 2歲,hMPV占所有的1.7%在冬季呼吸道感染(表3)。盡早期間主要hMPV循環,hMPV占所有的4.2%感染< 2歲的兒童。隨著年齡的增長hMPV下降的相對效應。在整個的1338名兒童,hMPV占1.3%(95%可信區間0.9% - -1.7%)的呼吸道感染在整個呼吸季節和2.7%(95%可信區間1.9% - -3.5%)的感染盡早期間連續hMPV循環。
圖2
圖2。每周人類metapneumovirus感染的比例在所有呼吸道感染兒童的研究中,芬蘭,2000 - 2001。
hMPV感染的比例在所有呼吸道感染期間每周的學習所示圖2。hMPV最高的相對效應在2月19日的一周,在此期間所有呼吸道感染的病毒占7.1%的研究對象。
病毒與hMPV
另一種病毒檢測與此同時8(17%)的47 hMPV-infected孩子。三個孩子有腸病毒2鼻病毒,和1都有流感病毒,副流感病毒的病毒,和nontypeable hMPV一起小核糖核酸病毒。
hMPV感染的臨床特點
hMPV感染的臨床研究結果分析了39個孩子誰hMPV是唯一病毒檢測(表4):97%的人咳嗽,90%有鼻炎,72%在發燒。有症狀的疾病持續時間的中位數是8天。急性中耳炎是最常診斷並發症;它發生在61%的兒童< 3歲。喘息在10%的兒童和喉炎hMPV-infected 8%。總共有38%的兒童用抗菌藥物治療。沒有一個孩子在送往醫院。
社會經濟的影響hMPV
總體而言,54%的hMPV-infected兒童缺席從日托或學校>1天(表4)。他們缺席的平均持續時間為3.3天。在38%的情況下,一個母公司錯過>一天的工作,因為孩子的hMPV病了。父母失去工作的平均時間是2.9天。
持久性hMPV RNA的急性疾病後鼻拭子
27(57%)的47個孩子hMPV感染,後續鼻拭子獲得了在隨後的呼吸道感染。中間間隔初始hMPV-positive標本和隨後的樣本42天(範圍7 - 82天)。hMPV無法檢測到的任何後續樣品後hMPV疾病。
這個前瞻性群組研究提供新的和詳細信息的影響hMPV沒有感染孩子。密切臨床隨訪的一大群孩子在整個呼吸季節使我們確定發病率和相對重要性的hMPV在所有兒童呼吸道病毒在不同的年齡群體。特定強度的研究,我們得到樣本病毒檢測在每一集的呼吸道疾病研究診所,不管症狀的嚴重程度或熱的存在與否,從而避免任何偏見引起的采樣隻選擇兒童呼吸道感染的人口。此外,症狀的兒童和他們的疾病記錄日常的社會經濟效應在整個研究期間。
我們的研究結果表明,hMPV的影響在社區中最大的最小的孩子。hMPV感染的發病率< 2歲的兒童大約是2 - 5歲的兒童的兩倍和10×高於兒童發病率>9歲。這一發現是一致的與血清學的研究表明,大多數孩子合同hMPV 5歲(1,24,25)。hMPV的影響最小的嬰兒可能甚至比在我們的研究中觀察到。在我們的群體中,發病率最高hMPV感染是兒童< 1歲,但小的兒童數量在這個年齡段限製我們對這一發現的畫任何確切的結論。
除了絕對的hMPV發病率最高的兒童< 2歲,hMPV在所有呼吸道病毒的相對效應是最大的在這個年齡段。期間hMPV不斷循環,這種病毒占> 4%的兒童呼吸道感染< 2歲。在一年一度的層麵上,hMPV占1% -2%的呼吸道感染我們的隊列。這個估計同意最近20年的研究的結果中hMPV的患病率從1%到5%的兒童上呼吸道感染在某一年< 5歲(12)。在我們的群體中,hMPV的總體效果是大大小於流感病毒,占≈7%的呼吸道感染在同一冬季(26)。然而,hMPV在當地爆發的實質性效果證明了我們發現疫情的高峰期間,hMPV負責7%的呼吸道感染兒童盡管流感病毒在社區傳播在同一時間(26)。
大多數孩子與hMPV咳嗽、鼻炎和發燒。與先前的報道相反的住院兒童的哮喘患病率較高(4,5,7,10,13),隻有10%的孩子在初級保健喘息,和這些孩子在送往醫院。這是可以理解的,因為患者更嚴重的疾病,通常在醫院,但這些結果也表明,大多數hMPV感染兒童相對較輕,臨床診斷的其他病毒感染。然而,重要的是急性中耳炎的高速率hMPV感染的並發症。一起類似的其他調查人員報告(12,13,27),hMPV特別良好的使一個孩子易患中耳炎的能力。這強調了臨床相似性hMPV和呼吸道合胞病毒,這也是主要引起病毒性急性中耳炎的兒童(28- - - - - -30.)。
在以前的研究中,hMPV已經很少發現無症狀的兒童(10,13)。我們不能在任何樣品中檢測出hMPV hMPV後獲得了在隨後的呼吸道感染疾病。這些發現暗示hMPV鼻粘膜是短暫的和證實的觀點hMPV RNA的檢測呼吸道分泌物強烈表明因果作用的病毒疾病。
hMPV患病率的變化從一季到下一季已經證明(12,13)。因此,我們的結果在1冬季並不直接適用於所有其他的冬天。然而,2年醫院的基礎上,研究在我們的區域,發行量hMPV實質上都是2000 - 2001年的冬季比冬天以下(31日)。因此,我們後續可能並不代表一個季節的季節與極低hMPV活動。我們獲得了鼻拭子,而不是鼻咽吸入物出於遵守重複抽樣。鼻拭子檢測的敏感性不同的呼吸道病毒≈90%相比,鼻咽吸入物(23)。因此,某些情況下hMPV可能沒有被診斷。此外,由於我們沒有使用血清學的分析,我們沒有數據hMPV感染的發病率,無症狀或輕微,父母不把孩子們研究診所。然而,這樣的亞臨床感染的臨床重要性可以忽略不計。
總之,我們前瞻性人群為基礎的研究提供了確鑿的證據hMPV感染兒童的影響。hMPV最大的影響在< 2歲的兒童。hMPV似乎也是一個主要的病毒誘發兒童急性中耳炎。雖然每年級hMPV僅占所有兒童呼吸道感染的一小部分,其相對的角色在所有呼吸道病毒期間大量當地hMPV爆發。
嘉尼•海基寧博士圖爾庫大學的兒科助理教授,芬蘭。他的研究興趣包括病毒性呼吸道感染和兒童中耳炎。
承認
本研究由惠氏,葛蘭素史克,歐洲科學流感工作小組,學院的芬蘭,芬蘭的兒科研究基金會,珍妮和Antti Wihuri基金會,圖爾庫大學醫院的基礎。
請使用下麵的表格提交通信作者或聯係他們在以下地址:
Terho嘉尼•海基寧,兒科,圖爾庫大學醫院,fi - 20520圖爾庫,芬蘭;